产品中心 / 产品类型 / 生化试剂 / 外泌体试剂盒

外泌体纯化试剂盒-30 mL (RK05871)

Exosupur分离荧光脂质体和杂蛋白的效果

通过外泌体颗粒与蛋白含量的比值可从整体上分析外泌体的纯度。从头对头对比数据中可知:外泌体纯化分离得到的外泌体 particle 数与蛋白含量比值最高,表明 外泌体纯化分离的外泌体纯度更高,杂蛋白含量更低。

通过比较不同外泌体纯化方法下的 miRNA qPCR 定量结果可见(上图右):由于 外泌体纯化富集的外泌体得率更高、纯度更高,使得外泌体的 miRNA定量值更高,而游离 miRNA 定量值非常低,能够更准确分析外泌体来源 miRNA。

蛋白酶+RNA 酶消化试验也进一步证实了 外泌体纯化得到的 RNA 更多的是来源于囊泡,而非囊泡外的游离 RNA。

同一样本,不同人操作或不同起始体积在外泌体分离、RNA 提取和 qPCR定量过程均会有一定偏差,基于外泌体纯化的荧光外泌体外参(ER)进行 Normaliza后的 RNA 定量结果一致性好。

All(5)|
Exosupur分离荧光脂质体和杂蛋白的效果

" onerror="this.src='/Public/Images/NOPicture.gif'" class="img-responsive zoomImg zoom-" alt="">
货号: RK05871
促销价:   ¥10575
抗体定制服务咨询

文献引用 (0)

产品信息

外泌体纯化排阻柱的数量 3 根
单根排阻柱的上样量 3mL
单根排阻柱的柱床体积 40mL
单根排阻柱的填料体积 30mL
单个馏分体积 1mL
空隙体积 5mL
外泌体收集馏分* 6~10 馏分
外泌体收集体积* 5mL
单根柱子重复次数 5 次
操作温度 常温(18℃-25℃)
操作方法 详见说明书
柱PH 环境 7
缓冲液 PBS 溶液(必须无菌,自备)
封柱液 20%乙醇溶液(自备)
清洗液 清洗液 0.5M NaOH(自备)
有效期 1 年
保存温度 4℃
自备耗材 超滤管(截留分子量100KD)、收集管(1.5mL EP 管或者15mL 离心管)、外泌体纯化试剂盒支架-30mL(货号 AI10052)

背景信息

外泌体(Exosomes)是由活细胞分泌的直径约 30-150nm 的细胞外囊泡(Extracellular Vesicles,EVs)。包含细胞来源的核酸、蛋白质和脂质等活性分子,具有介导细胞间通讯等功能,在哺乳动物繁殖和发育、免疫应答和感染、以及诸如代谢性疾病、心血管健康、神经退行性疾病和癌症在内的各种疾病中发挥重要作用,也是理想的液体活检标志物和治疗载体。
本试剂盒是专门用于从血浆、血清、尿液、细胞上清和脑脊液中提取细胞外囊泡的小量纯化试剂盒。试剂盒采用分子排阻色谱的原理,根据被分离组分的分子大小实现外泌体的分离。本试剂盒具有快速、高效、操作简单、对设备要求低等特点,可在60min内完成外泌体的分离纯化。提取的外泌体产物质量稳定可靠、蛋白污染程度低,可用于蛋白提取分析、RNA 提取分析、细胞功能检测等生物学实验。
外泌体纯化试剂盒仅用于科学研究,不用于临床诊断。尤其适用于各生物流体来源外泌体的 RNA、蛋白质和细胞功能学研究。

产品组分

简略操作流程图

FAQs

Q1:为什么柱子取出后直接加 1mL PBS 测流速有点慢?

测流速之前,需先将柱子和 PBS 放置室温平衡,再加 2 倍柱体积 PBS冲洗柱子,待洗完柱子后再加 1mL PBS 测流速。

可以重复使用 5 次。通过 2 倍柱体积 PBS 进行柱再生。但变性的蛋白质或脂质复合物很难在柱再生步骤中被洗脱下来,积累过多会对分离的纯度和精度产生较大影响,因此可通过 0.5M NaOH 清洗柱子,然后再用 PBS 冲洗柱子,直至流出液 PH 呈中性。

囊泡是 nm 级别的微观存在,肉眼不可见,并非就存在于肉眼看到的红色部分。若实在不放心,可采用我们的外泌体质控品对外泌体的分布进行标定。

外泌体纯化试剂盒是 SEC 的原理,该原理的分离方法相关文献已经有很多了(例如 JEV 等高水平权威杂志上很多文章,都用到了 SEC 分离外泌体,包括细胞上清,血浆,脑脊液,尿液等样本形式,涵盖了方法学比较和应用等方面);另外,这也是 ISEV(国际囊泡协会)推荐的方法,可以获得高特异的外泌体。

外泌体纯化特别适合于细胞共培养等功能性研究,因为,首先,分离过程中不会引入物理剪切力损伤(超速离心)以及化学物质污染(PEG),最大限度的保证了外泌体完整的生物结构与生物学活性。其次,外泌体纯化的高回收率保证了可用于细胞共培养的外泌体量。第三,外泌体纯化去掉了更多杂蛋白得到更高纯度外泌体(上面的数据性能展示中),在细胞实验中可以最大限度的避免了未知成分带来的生物活性影响。

尿液样本属于大体积的样本,在上样前需用超滤管进行浓缩,可浓缩约30 倍,也即 30mL 尿液可以浓缩至 1mL。可自行购买 100kD 超滤管,亦从我们这里购买(密理博超滤管)。

首先,基于 SEC 的分离和纯化技术,在蛋白和单抗制剂的生产中已经属于成熟工艺。例如,在 2015 年 ISEV 的一篇 position paper(Applying extracellular vesicles based therapeutics in clinical trials – an ISEV position paper,DOI:10.3402/jev.v4.30087)中专门提到,未来用于治疗的外泌体分离方法,建议参考蛋白类制剂的生产工艺,例如 SEC、IEC、切向流过滤以及这几种方法相互配合的工艺路线。因此,SEC 填料的残留问题至少在 ISEV 看来不构成威胁。

其次,SEC 处理大规模细胞上清的难度,回答这个问题的关键是看跟什么技术进行比较。国际社会上对这一方法进行比较时,通常是跟密度梯度离心直接对标,因为 PEG 沉淀和差速离心得到的产物纯度无法跟前面两个相提并论。如下图(toward exosome-Based therapeutics: isolation, Heterogeneity, and Fit-for-purpose potency,DOI: 10.3389/fcvm.2017.00063)黄色高亮处标记的,密度梯度离心虽然产物纯度高,但存在这么几个问题,包括 i)蔗糖垫可能导致渗透压过高;ii)相比 SEC 对大体积样本的兼容性更差等。所以上样前的超滤浓缩从一定程度可解决该问题,另外国际上有将近 1L 体积的排阻柱子用于细胞上清的处理。

>