货号: RK20407
规格:
2X One Step RT-qPCR Probe Buffer | RM21462 |
One Step Probe HS Taq | RM21463 |
ABScript II RT Enzyme Mix | RM21464 |
50X ROX Dye I | RM21465 |
50X ROX Dye II | RM21466 |
RNase-free ddH2O | RM20214 |
应用 | PCR, RT-qPCR, RT-PCR and cDNA Synthesis, DNA Amplification, PCR & qPCR |
---|---|
保存温度 | -20°C |
Unit Assay Conditions | RM21466,50X ROX Dye II|RM21465,50X ROX Dye I|RM21464,ABScript II RT Enzyme Mix|RM21463,One Step Probe HS Taq|RM21462,2X One Step RT-qPCR Probe Buffer|RM20214,Nuclease-free H2O| |
如果您的问题未得到解决,请联系我们的技术支持团队为你进一步解答。
联系我们引物设计不够优化:根据引物设计原则重新设计引物。
引物浓度太高:适当降低引物浓度。
扩增曲线不光滑:信号太弱,提高模板浓度并重复实验。
个别扩增曲线骤降:反应管内有气泡,由于温度升高后气泡破裂,使仪器检测到的荧光值突然降低所致。处理样本时要注意离心,加样过程中尽量避免吸打出气泡。
扩增曲线上飘:仪器测试默认基线设置为3至15个循环荧光值的标准差,可根据实际扩增情况进行相应基线调整。
反应循环数不够:一般设置循环数为40,但需注意的是过多的循环会增加过多的背景信号,降低数据可信度。
确认引物是否降解:长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性,以排除引物降解的可能性。
确认程序中是否设置了信号采集步骤:两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段;三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。
模板浓度太低:减少稀释程度并重复实验。
模板降解:重新制备模板,重复实验。
预变性时间不足:本产品采用热启动的Taq酶,请确保按照反应程序设置的3 min预变性时间进行实际操作。
扩增效率极低:优化反应条件,重新设计引物。
模板浓度太低:减少稀释程度,重复实验。
模板降解:重新制备模板,重复实验。
PCR产物太长:一般将PCR产物长度设计为70~200 bp范围内。
反应体系中存在PCR反应抑制剂:一般为加入模板时带入,加大模板稀释倍数或者重新制备新的模板。
预变性时间不足:本产品采用热启动的Taq酶,请确保按照反应程序设置的3 min预变性时间进行实际操作。
反应体系或者水被污染:更换新的Buffer或者水进行重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。
引物二聚体的出现:一般在35个循环以后阴性对照出现扩增属正常情况,可配合熔解曲线进行分析。
加样体积不准:使用性能较好的移液枪,扩大反应体系,增加组分加入体积。
定量PCR仪孔间温度不一致:定期校准仪器。
模板浓度太低:模板浓度越低,重复性越差,减少模板稀释度或提高加样体积。
阈值设置:对于不同板间的重复试验,请确保两次试验仪器阈值设置保持一致。
submit your question on RK20407 below
During business hours, we will respond to your email with in 24 hours. For any questions submitted on the weekend, a response will be received on Monday.
For immediate assistance during business hours M-F (excluding major holidays), please contact us.