在生命科学研究中，RNA干扰技术已成为基因功能研究的利器。而siRNA转染试剂作为递送siRNA进入细胞的关键工具，其性能将直接影响着实验成败。
各位科研小伙伴们，是否经历过以下“至暗时刻”：精心设计的siRNA，转染进去却“石沉大海”。RT-qPCR结果显示基因几乎没被敲低？明明镜下“荧光点点”，Western Blot条带却黑得发亮，仿佛转了个“寂寞”?
今天，为大家隆重介绍全村最靓的仔-siRNA转染试剂，它就像为RNAi实验量身打造的“黑科技”，助您轻松攻克实验难关！

01.为什么选择siRNA专用转染试剂？
传统观念认为，能转染质粒DNA的试剂就一定能转染siRNA，然而事实并非如此：
质粒DNA通常有数千碱基对，结构相对稳定。而siRNA大小通常为21-23bp，其作为核糖核苷酸极易被降解 。此外，两者的胞内作用机制完全不同：质粒DNA通过胞吞作用进入细胞，并从内涵体中逃逸出来进入细胞核才能实现基因的过表达，而siRNA由于极易降解则需要更高的内涵体逃逸效率，否则可能被困其中最终被溶酶体降解，无法释放到细胞质中与mRNA结合发挥基因沉默作用 。
因此，针对siRNA设计专用转染试剂从而实现“精准制导”是RNAi干扰转染实验的绝佳选择。


02.被隔壁实验室追问的ABclonal-siRNA转染试剂，转染界的何方魔丸？
产品亮点
1-基因沉默效率高：专为RNAi实验设计，精准制导基因沉默
2-极致低细胞毒性:可降解生物纳米材料，守护细胞健康状况
3-广谱细胞适用性：适用于多种类型细胞，硬核细胞不再“难啃”
4-操作简单快捷：只需孵育5 min，新手也能轻松拿捏

产品性能展示

细胞兼容广泛

使用ABclonal siRNA转染试剂转染小干扰RNA至多种贴壁/悬浮细胞，均可实现高效基因沉默。

基因沉默效率高

分别使用ABclonal、Vendor T RNAiMAX和Vendor YS siRNA转染试剂进行RNAi实验测评，结果表明：在同等实验条件下，RT-qPCR和Western blot结果显示，ABclonal的敲低效果与主流进口转染试剂Vendor T RNAiMAX基本相当，优于Vendor YS。

图1. 基因敲低测评结果（RT-qPCR/Western blot）

03.siRNA转染实验的流程
siRNA转染操作流程总览
siRNA转染操作步骤包括：细胞准备与接种、siRNA转染复合物的制备、转染复合物加入到细胞中。

图2. siRNA转染实验操作流程总览（注：图片来源于网络）

siRNA转染实验全流程细节把控
1.细胞准备：

1. 1-细胞状态：使用形态正常，细胞活率在90%以上的健康细胞，确保细胞没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的细胞，需要在转染前传代3~4次。
2. 2-细胞密度：建议在转染前24 h接种细胞，贴壁细胞转染时的细胞密度一般在70%-90%。
3. 3-细胞培养基：用于转染实验的细胞最好不要在完全培养基中添加抗生素，对于一些敏感细胞，抗生素的存在会引起细胞毒性。

 2.转染复合物的制备：

1. 1-siRNA-Enhancer Reagent：取适量的siRNA、Enhancer Reagent于微量离心管中，轻柔吹打混匀。
2. 2-siRNA-Enhancer Reagent-转染试剂：取适量的PolyBooster RNAi Transfection Reagent加入到a步骤溶液中，轻柔吹打混匀，室温静置孵育5 min。
3. 3-siRNA转染复合物的稀释：向b步骤溶液中加入适量的Opti-MEM，轻柔吹打混匀。

 3.转染复合物加入到细胞中：

1. 1-转染复合物滴加时需要逐滴加入，并及时充分混匀，避免培养基局部转染试剂浓度过高。
2. 2-转染后8 h后可更换新鲜培养基。对于一些敏感细胞，换液处理可以降低细胞毒性。

 

4.实验结果的分析：

1. 1-选择合适的分析方法。运用qPCR检测目的基因mRNA的表达情况，运用Western blot检测目的蛋白的表达情况。
2. 2-合适的检测时间。mRNA水平的检测一般在转染后24~48 h，蛋白水平的检测一般在48~72 h。不同基因的半衰期不同，建议多设几个时间点进行检测，并根据实际情况合理调整检测时间。

04.产品订购信息


05.相关产品推荐


06.常见问题与解决方案

1-siRNA 转染与质粒DNA 转染的区别

2-转染的阳性对照组siRNA-FAM-NC，在显微镜下基本观察不到荧光信号或荧光信号微弱

FAM标记的荧光探针在转染之后会逐渐淬灭，因此最佳的观察时间一般在转染之后的 8 h 左右。同时，由于FAM的荧光信号较为微弱，使用荧光显微镜可能存在无法能有效观察到荧光信号的现象。

3-荧光对照组有荧光信号，但目的基因检测结果均无敲低效果

1. 1-siRNA设计或靶点问题： siRNA本身无活性，或存在脱靶效应。建议使用至少2-3条针对同一个靶基因不同的siRNA序列。同时使用已验证过的阳性对照siRNA（如siRNA-GAPDH）来排除转染体系本身的问题。
2. 2-siRNA质量问题：siRNA存在降解，或使用了未纯化/未修饰的廉价siRNA。建议进行严谨的预实验验证，并使用高质量的、经过修饰的siRNA以确保其稳定性和特异性。同时需要注意siRNA储存的条件和时间。

4-RT-qPCR结果显示基因表达水平敲低效果明显，Western blot结果显示蛋白表达水平基本没有下调效果

1. 1-mRNA水平的检测一般在转染后24-48 h，蛋白水平的检测一般在转染后48-72 h。不同基因的半衰期不同，因此，建议多设几个时间点进行检测，根据实际情况合理调整检测时间。
2. 2-目的蛋白半衰期：查找并确认检测的目的蛋白大致半衰期，如果半衰期较长，可能需要更长的沉默干扰时间才能检测到目的蛋白表达水平下调。
3. 3-翻译效率反馈性升高：存在当细胞内某个关键蛋白表达量减少时，细胞内稳态调控机制会启动负反馈调节作用，将剩余少量mRNA更高效地翻译成相对应的蛋白。因此，如果无法延长实验时间（mRNA敲低效果只能维持几天时间），可以考虑尝试进行重复转染（在第一次转染后3-4天再次转染）来维持对细胞内相应mRNA水平的持续敲低。
4. 4-蛋白稳定性补偿：存在当某种蛋白表达量减少时，为维持内环境稳态，细胞会启动抑制该蛋白的降解通路（如抑制其泛素化降解等），导致蛋白分子的半衰期变长。因此，建议可以尝试结合蛋白质合成抑制剂（如CHX等）进行干预处理，但这通常只适用于相关机制的研究，不适用于常规基因敲低实验。
5. 5-样本制备问题：尽量使用同一批转染处理的细胞，或将总细胞裂解液分为两份：一份用于提取总细胞RNA，一份用于提取细胞总蛋白，确保两组数据来源完全一致。
6. 6-抗体过载/信号饱和：显影曝光时间过长或蛋白上样量过大可能会导致wb条带信号达到饱和，导致目的条带微小差异被掩盖。可尝试将蛋白样品进行梯度稀释上样或缩短曝光时间，观察条带灰度值是否在线性范围内存在差异。