服务流程

服务内容及说明

服务内容 免疫动物 交付内容 周期
  1. 免疫前采血；
  2. 合成修饰性和非修饰性2条多肽，修饰性偶联KLH用于免疫；
  3. 动物免疫5次（鼠类4次）；
  4. 最终采血；
  5. 抗血清Dot blot检测，效价1:50000以上；
  6. 修饰性多肽和非修饰性多肽分别抗原亲和纯化；
  7. 修饰性多肽抗原和非修饰性多肽抗原Dot blot验证

2只兔子/3只大鼠/

3只豚鼠/5只小鼠

  1. 兔子阴性血清100μL，
  2. 鼠类阴性血清15μL
  3. 2 mg 以上抗原亲和纯化后的多克隆抗体，浓度为1 mg/mL以上，并保证制备抗体能在Dot blot实验中保证1:1000稀释能检测到100 ng抗原。

15周

*备注：

  1. 如果抗原由客户提供：修饰性多肽长度小于15个氨基酸，纯度大于90%， 24mg；非修饰性多肽长度小于15个氨基酸，纯度大于90%, 14mg。
  2. 考虑到修饰位点较非修饰位点所占比例较少，同时需进行二次纯化，修饰性抗体制备的成功率一般低于常规抗体制备，为了保证免疫之后能够尽可能得到有效的抗体，根据ABclonal多年抗体制备的经验，建议客户免疫3-4只兔子。

解决方案

ABclonal标准多克隆抗体制备采用最优化的制备流程，所需时间也最短。深受广大科研用户的好评。多抗制备选用两只SPF（Specific Pathogen-Free）级日本大耳白，采用完全弗氏佐剂（CFA）和不完全弗氏佐剂（IFA）皮下多点注射。我们保证所有免疫动物都注射同一抗原。

流程 时间 描述
阴性血清采集 Day0 免疫前血清采集 (5mL/只)
一免 Day 1 0.7mg免疫原（CFA）, 皮下多点注射（10点）
二免 Day 14 0.35mg免疫原（IFA）, 皮下多点注射（4点）
三免 Day 35 0.35mg免疫原（IFA）, 皮下多点注射（4点）
四免 Day 56 0.35mg免疫原（IFA）, 皮下多点注射（4点）
抗血清采集 Day 63 Two bleeds (100μL/只)
DB 检测 Day 64 根据DB检测结果，决定是正常牺牲兔子还是适当调整免疫周期
五兔 Day 70 牺牲兔子或加免，0.35mg免疫原（IFA）, 皮下多点注射（4点）
纯化/检测 2-3周 2mg以上抗原纯化抗体

备注：70天之后，项目周期的具体时间不是确定的，需要根据抗血清采集和DB检测情况。

其他修饰类型

ABclonal同时提供DNA甲基化，RNA甲基化，泛乙酰化，非组蛋白修饰等其他修饰性抗体制备服务，满足客户全方位需求。

Pan Acetyl-Lysine

Western blot analysis of extracts of various cell lines, using Pan Acetyl-Lysine antibody ( A2391 ) at 1:1000 dilution.HeLa cells and NIH/3T3 cells and C6 cells were treated by TSA (1 uM) at 37℃ for 18 hours.

pan-TriMethyl-lysine

Western blot analysis of extracts of various cell lines, using pan-TriMethyl-lysine pAb ( A18292 ) at 1:500 dilution.HeLa and MCF7 cells were treated by ADOX (100 μM) for 24 hours .

Pan Phospho-Tyrosine

Western blot analysis of extracts of various cell lines, using Pan Phospho-Tyrosine antibody ( AP1162 ) at 1:1000 dilution.Jurkat cells and NIH/3T3 cells and C6 cells were treated by Pervanadate (1 mM) at 37℃ for 30 minutes.

Acetylated (4K) custom antibody

案例展示

南京农业大学生命科学学院蒋明义教授课题组发现水稻“哼哈二将”双负调节抗逆性

  • ABclonal合作技术：
    DMI3、PP45和DMI3T263(p)抗体定制
  • 题目：
    Abscisic acid inhibits rice protein phosphatase PP45 via H2O2 and relieves repression of the Ca2+/CaM-dependent protein kinase DMI3
  • 物种：
    水稻
    应用：
    WB Co-IP
    PMD：
    30538152
  • 客户单位：
    南京农业大学生命科学学院植物学蒋明义教授为通讯作者，师资博士后倪岚为论文第一作者，生科院张阿英教授和植保院张正光教授也参与

通过Y2H、BiFC与GST Pull-Down的体外实验，与Co-IP的体内实验，发现并证明了OsDIM3与PP45的相互作用。

作者发现在体外与体内中，H2O2和ABA对于OsDIM3与PP45的相互作用不一致，ABA的抑制仅存在于体内实验中。

PP45在体内、体外接收ABA引起的H2O2上调信号后，去磷酸化DIM3 T263位点。

加州大学圣地亚哥分校药学院Frank B.Furnari课题组发现脑胶质瘤的致命弱点

  • ABclonal合作技术：
    pY240-PTEN磷酸化多肽合成及重组兔单抗定制
  • 题目：
    Inhibition of Nuclear PTEN Tyrosine Phosphorylation Enhances Glioma Radiation Sensitivity through Attenuated DNA Repair
  • 物种：
    人和小鼠
    应用：
    WB IHC
    PMD：
    30827889
  • 客户单位：
    加州大学圣地亚哥分校Jianhui Ma教授课题组

不同肿瘤样本的pY240-PTEN和pH2AX染色结果，pY240-PTEN含量较高的样本其DNA损伤修复进程与含量低的样本相比更快

中科院上海生化与细胞研究所杨巍维课题组与中科院大连化学物理研究所李国辉课题组揭示尿苷二磷酸葡萄糖（UDP-Glc）抑制肺癌转移的新功能

  • ABclonal合作技术：
    pUGDH(Y473)磷酸化抗体定制
  • 题目：
    UDP-glucose accelerates SNAI1 mRNA decay and impairs lung cancer metastasis
  • 物种：
    人
    应用：
    WB IF
    PMD：
    31085179
  • 客户单位：
    中科院上海生化与细胞研究所杨巍维课题组与中科院大连化学物理研究所李国辉课题组为文章的通讯作者，广州大学生命科学学院精准基因编辑工程中心王雄军副教授，中国科学院生化细胞所博士生刘瑞隆、朱文成、大连化物所楚慧郢为论文共同第一作者

UGDH Y473磷酸化抗体和SNAIL 抗体对114例肺癌标本进行了IHC分析

斯坦福大学的Or Gozani课题组发现METTL13如何通过提高蛋白翻译效率促进癌症发生（该课题组在非组蛋白甲基化研究方面一直是领跑者，在Naure上还报道了哺乳动物中首个组氨酸甲基转移酶）

  • ABclonal合作技术：
    eEF1AK55me1、eEF1AK55me2、eEF1AK55me3甲基化抗体定制
  • 题目：
    METTL13 Methylation of eEF1A Increases Translational Output to Promote Tumorigenesis
  • 物种：
    人
    应用：
    DB WB IHC
    PMD：
    30612740
  • 客户单位：
    斯坦福大学/德克萨斯大学 Or Gozani课题组

IHC结果显示METTL13和eEF1AK55me2在胰腺癌病变（箭头）中表达，但在相邻的正常腺泡（星号）中不表达。

eEF1AK55me2抗体特异性检测

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