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Core component of nucleosome. Nucleosomes wrap and compact DNA into chromatin, limiting DNA accessibility to the cellular machineries which require DNA as a template. Histones thereby play a central role in transcription regulation, DNA repair, DNA replication and chromosomal stability. DNA accessibility is regulated via a complex set of post-translational modifications of histones, also called histone code, and nucleosome remodeling.
* 该数据来源于赛特新思(citexs.com)
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首先,一般抗体不推荐客户回收利用,抗体使用之后缓冲体系已经发生改变,不同客户在回收抗体的保存条件上也会有差异,所以抗体回收使用效果无法保证。另外,ABclonal公司也做过一批抗体回收验证测试,测试结果显示不同抗体可回收次数不同,一般效价越高的抗体,可重复使用的次数越多,客户可根据实验情况来确定。
注:我们将孵育完毕后剩余的抗体回收到离心管中置于4℃保存,效价高的抗体可至少保存1周,至少重复利用3次。
武汉爱博泰克生物(ABclonal)科技有限公司是国产品牌,她成立于2011年,公司依托ABclonal美国波士顿抗体与蛋白研发中心、中国光谷生物城(武汉)抗体生产基地以及上海张江分子酶研发中心,凝聚了十余位来自哈佛大学、麻省理工、复旦大学、上海交大、中科院生化细胞所和武汉大学的全球知名分子和免疫学方面博士,组成我们的科学家团队,通过聚焦抗体与酶核心技术,致力于打破国际技术的垄断,将公司打造成为科研工具和诊断原料的国内领导品牌,乃至弯道超越国际巨头。 我们拥有包括兔多克隆抗体、小鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体的生产研发平台,同时也有包括WB,IHC,IF,IP,CHIP在内的检测平台,我们对每一支自产的抗体进行了严格的检测。当然,我们部分直销地区也可以帮客户代购进口品牌的产品。同时也有抗体定制服务。ABclonal抗体优势:1,严自检,保质量;2产品多,指标全;3,价格低,货期短。注:ABclonal抗体价格体系详情见附件
ABclonal抗体成分在平时工作当中,常会有客户咨询我们的抗体用的什么buffer进行保存,一般来说,我们的buffer的成分是:PBS含0.03%的proclin300、0.05%牛血清白蛋白、50%甘油;也有一些是PBS含0.03%的proclin300,50%甘油。防腐剂 Proclin 300活性成分主要是2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)。ProClin生物灭活剂能够迅速穿透细胞膜,抑制对细胞呼吸至关重要的特定酶,因此一接触微生物有机体就会立即抑制细胞活性。ProClin的多个特定毒性位点可以防止微生物产生高水平的耐药性。
一、实验仪器试剂和耗材
二、实验步骤
Dot Blot检测采用NC膜,取NC膜裁成6.5cm宽长条,并在其上画长宽为1cm×1cm正方形小格(在膜上面的蓝色纸上画,画格时膜(白色)与蓝色纸必须完全重叠,让蓝色纸上的正方形小格能在膜上留下正确的划痕)。
多肽使用0.45μM的NC膜,DNA/RNA Oligo 使用0.2μm的NC膜。
将不同浓度的多肽用PBS稀释为成50ng/ul(稀释为需要的浓度即可)。或者将不同浓度的DNA/RNA Oligo 用无酶水稀释至10μM(稀释为需要的浓度即可)。
揭开膜上面的蓝色保护纸,用移液器吸取50ng/μL多肽稀释液2ul点在膜上1cm×1cm正方形小格中心,即多肽包被量为100ng(包被量根据需求调整)。点样完成后,将NC膜放入37℃烘箱中30min。
如样本为DNA/RNA Oligo,则用移液器吸取10μM DNA/RNA Oligo稀释液2ul点在膜上1cm×1cm正方形小格中心,即每小格DNA/RNA Oligo包被量为100μM(包被量根据需求调整)。点样完成后,将NC膜放入37℃烘箱中30min,再用紫外交联20min。
把膜放入相应的大小的抗体孵育容器中,加入适量Blocking Buffer室温封闭1h。
封闭结束10min前,用Antibody Dilution Buffer稀释一抗备用。封闭结束后去除封闭液,加入稀释好的一抗工作液,室温2h或4℃过夜。
去除一抗工作液,加入适量TBST Buffer洗杂4次,5min/次。
洗杂结束前10min,用Antibody Dilution Buffer稀释二抗备用。去除TBST Buffer,加入稀释好的二抗工作液,室温1h。
去除二抗工作液,加入适量TBST Buffer洗杂4次,5min/次。
一、实验仪器及试剂
二、实验步骤
(1)细胞收集
(2)总蛋白提取
(3)蛋白浓度测定(BCA法)
(1)制胶器安装
(2)凝胶配置
(3)上样
(4)电泳
(1)准备工作
(2)转膜
根据所使用的一抗种类,选择进行下述其中1项的具体步骤
(1)对于无偶联的一抗
(2)对于偶联有HRP的一抗
附表1:BSA标准品稀释
1mg/ml BSA(μl) | 稀释液(μl) | 对应的蛋白含量(mg/ml) |
---|---|---|
0 | 20 | 0 |
1 | 19 | 0.05 |
2 | 18 | 0.1 |
4 | 16 | 0.2 |
8 | 12 | 0.4 |
12 | 8 | 0.6 |
16 | 4 | 0.8 |
20 | 0 | 1 |
附表2:分离胶浓度的选择
分子量(kDa) | 分离胶浓度 |
---|---|
X≤10 | 15% |
10<X≤15 | 13.5% |
15<X≤25 | 12% |
25<X≤35 | 11% |
35<X≤40 | 10% |
40<X≤55 | 9% |
55<X≤70 | 8% |
70<X≤100 | 7% |
100<X | 6% |
附表3:分离胶配制
分离胶浓度 | 6% | 7% | 8% | 9% | 10% | 11% | 12% | 13.5% | 15% |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
去离子水(mL) | 5.3 | 4.9 | 4.6 | 4.3 | 4.0 | 3.65 | 3.3 | 2.8 | 2.3 |
30%丙烯酰胺 (mL) | 2 | 2.4 | 2.7 | 3.0 | 3.3 | 3.65 | 4.0 | 4.5 | 5.0 |
1.5M Tris-HCL(pH8.8) (mL) | 2.5 | ||||||||
10%SDS(mL) | 0.1 | ||||||||
10%AP(mL) | 0.1 | ||||||||
TEMED(mL) | 0.01 | ||||||||
总体积(mL) | 10 |
附表4:5%浓缩胶配方
5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | |
---|---|---|---|---|---|
去离子水(mL) | 1.1 | 2.1 | 2.7 | 3.4 | 4.1 |
30%丙烯酰胺 (mL) | 0.33 | 0.5 | 0.67 | 0.83 | 1.0 |
1.0M Tris-HCL(pH6.8) (mL) | 0.25 | 0.38 | 0.5 | 0.63 | 0.75 |
10%SDS(mL) | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 |
10%AP(mL) | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 |
TEMED(mL) | 0.002 | 0.003 | 0.004 | 0.005 | 0.006 |
总体积(mL) | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
附表5:转膜条件选择
分子量(kDa) | 建议转膜条件(湿转) |
---|---|
X≤10 | 恒流200mA,30min |
10<X≤15 | 恒流200mA,40min |
15<X≤20 | 恒流200mA,50min |
20<X≤50 | 恒流200mA, 1kDa/min+20min |
50<X≤100 | 恒流200mA, 1kDa/min+30min |
100<X≤150 | 恒流250mA, 1kDa/min+20min |
150<X≤180 | 恒流270mA, 1kDa/min(时间控制在3h内) |
180<X | 恒流270mA, 1kDa/min(时间控制在4h内) |
一、实验仪器及试剂
电磁炉、压力锅、4℃冰箱、恒温恒湿箱、烘箱、光学显微镜、移液器、孵育湿盒、抗原修复盒。
二、实验步骤
一、实验试剂:
二、实验步骤
(1)贴壁培养细胞
(2)悬浮培养细胞
(3)组织样本
(1)变性洗脱
此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。
(2)非变性洗脱
一、实验仪器及试剂
4℃冰箱、恒温恒湿箱、通风橱、移液器、避光孵育湿盒。
二、实验步骤
一、实验仪器及试剂
微波炉、4℃冰箱、恒温恒湿箱、烘箱、移液器、避光孵育湿盒、抗原修复盒。
二、实验步骤