服务介绍

  • 翻译后修饰(Post-translational Modifications, PTMs)是生命活动中的重要现象,它们有助于生物活性的多样性,并影响蛋白质结构和细胞功能。 蛋白质磷酸化,甲基化和乙酰化是已知存在于体内的200多种不同修饰物的最常见的修饰类型。
  • 这些位点特异性抗体具有许多潜在的应用,包括细胞信号传导,蛋白质结构与功能,定位,疾病诊断等。ABclonal目前已成功开发数千个修饰性抗体定制服务项目。
  • 修饰性抗体制备经过修饰性多肽和非修饰性多肽两次亲和纯化,以提高抗体特异性。

PTMs in the Cell

The major types of post-translational modifications (Jensen O. N. 2006)

ABclonal提供多种修饰性抗体制备


Phosphorylation Acetylation Methylation Ubiquitination
Citrullination Succinylation Alkylation Isoprenylation
Prenylation Sumoylation Tyrosine Sulfation Tyrosine Nitration
Glycosylation Biotinylation Polyglutamylation Other PTMs

一站式修饰性抗体制备


服务内容 免疫动物 交付内容 周期
1、免疫前采血;
2、合成修饰性和非修饰性2条多肽,修饰性偶联KLH用于免疫;
3、动物免疫4次;
4、最终采血;
5、抗血清Dot blot检测,效价1:50000以上;
6、修饰性多肽和非修饰性多肽分别抗原亲和纯化;
7、修饰性多肽抗原和非修饰性多肽抗原Dot blot验证
2只兔子/3只大鼠/3只豚鼠/5只小鼠 1、200 μL免疫前阴性血清(大小鼠和豚鼠提供50μL);
2、1 mg 以上纯化的免疫原;
3、2 mg 以上抗原亲和纯化后的多克隆抗体,浓度为1 mg/mL以上,并保证制备抗体能在Dot blot实验中保证1:5000稀释能检测到100 ng抗原。
13周

备注:

1、 如果抗原由客户提供:修饰性多肽长度小于15个氨基酸,纯度大于90%, 24mg;非修饰性多肽长度小于15个氨基酸,纯度大于90%, 14mg。

2、 考虑到修饰位点较非修饰位点所占比例较少,同时需进行二次纯化,修饰性抗体制备的成功率一般低于常规抗体制备,为了保证免疫之后能够尽可能得到有效的抗体,根据我们多年抗体制备的经验,建议客户免疫3-4只兔子。

修饰性多肽的长度一般建议14个氨基酸左右。其中10mg用于动物免疫,10mg用于抗原亲和纯化,4mg用于QC检测。

非修饰性多肽的长度一般建议14个氨基酸左右,10mg用于亲和纯化,4mg用于QC检测。

为了得到更加特异性的修饰性抗体,我们建议用更短的修饰性肽进行交叉纯化。

服务特色

专业的抗原设计(免费)更多


抗体制备成功的关键在于抗原的合理设计。

高质量抗原制备更多


我们通过专业的分析,选择最佳的区域合成多肽,偶联至KLH作为免疫原免疫动物

每一条合成的修饰肽和对照肽,都经过HLPC和MS严格质控,得到高纯度,高质量的抗原

其他修饰类型


ABclonal同时提供DNA甲基化,RNA甲基化,泛乙酰化,非组蛋白修饰等其他修饰性抗体制备服务,满足客户全方位需求。

以日本晴愈伤(相同质量,约3g左右)为ChIP取样材料,以02g和03g为验证靶基因,同时用Anti-H3K27me3(Company M)和Anti-H3K27me3(ABclone)做抗体免疫沉淀,结果如图所示

结论:
ABclonal的anti-H3K27me3免疫沉淀的效率是Company M的anti-H3K27me3的10倍

高通量检测


ABclonal已建立全面完善的抗体检测平台,以WB、IHC、IF检测为主,IP、RIP、ChIP 、ChIP-seq、CRISPR KO敲除验证等多元化检测为辅,竭诚为客户提供全面并且可靠的数据,致力成为全球检测方法最齐全的抗体检测平台之一。

解决方案

ABclonal标准多克隆抗体制备采用最优化的制备流程,所需时间也最短。深受广大科研用户的好评。

多抗制备选用两只SPF(Specific Pathogen-Free)级日本大耳白,采用完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)皮下多点注射。我们保证所有免疫动物都注射同一抗原。

流程 时间 描述
阴性血清采集 Day 0 免疫前血清采集 (5mL/只)
一免 Day 1 0.5mg免疫原(CFA), 皮下多点注射(10点)
二免 Day 14 0.25mg免疫原(IFA), 皮下多点注射(4点)
三免 Day 35 0.25mg免疫原(IFA), 皮下多点注射(4点)
四免 Day 56 0.25mg免疫原(IFA), 皮下多点注射(4点)
抗血清采集 Day 63 Two bleeds (1mL/只)
ELISA 检测 Day 64 根据ELISA检测结果,决定是正常牺牲兔子还是适当调整免疫周期
五免 Day 70 牺牲兔子
或加免,0.25mg免疫原(IFA), 皮下多点注射(4点)
纯化/检测 2-3周 2mg以上抗原纯化抗体
备注:70天之后,项目周期的具体时间不是确定的,需要根据抗血清ELISA效价检测情况。
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