随着免疫诊断技术的广泛应用,同时抗体药等在多种疾病(癌症、炎症、自身免疫性疾病等)治疗中取得了显著的进展。诊断靶标检测、生物药的免疫原性检测、药代动力学检测、宿主细胞蛋白残留检测等免疫学检测显得尤为重要。ABclonal拥有丰富的抗原/抗体生产经验、严格的质控标准、规模化的生产体系以及多元化的检测体系,可提供双抗夹心法、直接竞争法、间接竞争法、双抗原夹心法等试剂盒的合作开发。

服务流程

服务案例

Case 1

Human IL-2重组兔单克隆抗体对及ELISA KIT开发
白细胞介素-2 (Interleukin-2,IL-2 )是趋化因子家族的一种细胞因子,能调控免疫系统中白血球的细胞活性,对机体免疫应答和抗病毒感染等有重要作用。

  • 需求:IL-2 检测试剂盒开发,用于诊断检测
  • 抗原:真核重组蛋白
  • 验证:真核重组蛋白
  • 筛选:ELISA重组兔单克隆抗体配对,ELISA KIT验证

ELISA重组兔单克隆抗体对:超高灵敏度、特异性强、稳定性强,检测限可低至50pg/mL,比进口试剂高10倍,灵敏度<0.7pg/mL。

01

灵敏度高

图1A:ABclonal检测线性范围0.78-50pg/mL

图1B:R公司检测线性范围7.8-500pg/mL

与R公司的抗体及检测体系对比,IL-2兔单抗检测限可低至50pg/mL,是公司R的10倍,并且检测灵敏度<0.7pg/mL。

02

特异性强

图2A:IL-2抗体与近似蛋白反应鉴定

图2B:IL-2抗体抗干扰水平鉴定

选择与人 IL-2 结构类似,及相关受体,物种同源高蛋白进行特异性分析,结果显示(图2A),在10ng/mL重组蛋白参与的反应中,均未见交叉反应,特异性强;检测人 IL-2 蛋白的同时,加入人IL-2RA/小鼠IL-2蛋白,对抗体的结合是否会受到加入蛋白的影响进行分析,结果显示(图2B),在10ng/mL重组蛋白人IL-2RA/小鼠IL-2参与的反应中,人 IL-2蛋白的检测均未受到影响,特异性强。

03

回收率

样本类型 平均回收率(%) 范围(%)
血清 106 90-120
血浆 102 91-116

图3:IL-2抗体不同样本回收率测试

将高、中、低3个不同浓度的人 IL-2真核蛋白加入到血清中检测,并计算蛋白的回收率,结果表明在检测复杂样本基质的实验中,ABclonal兔单抗对抗干扰能力强,能保持较高的特异性捕捉能力。

04

稳定性强

图4:不同批次IL-2兔单抗稳定性测试

将3个批次的IL-2兔单抗进行37℃,3d加速破坏,并分别做对比测试。结果表明,有5%左右降低,属于正常范围,稳定性较强。

Case 2

GPCR抗体对及ELISA KIT合作开发
G蛋白偶联受体(G Protein-Coupled Receptors,GPCRs)是一大类膜蛋白受体的统称。GPCR是人类最大的膜受体蛋白家族,在细胞信号转导中发挥重要作用。GPCR与人类疾病关系密切,目前有40%以上的上市药物以GPCR为靶点。由于GPCR含有多次跨膜结构域,要获得稳定和完整GPCR蛋白难度极大,因此其研究极具挑战性和重要性。本项目同时采用多种胞外区段为免疫原,同时进行兔多抗和鼠单抗项目,筛选到配对的抗体对,为临床诊断打下了坚实的基础。MRGPRX2是药物过敏反应的关键受体,GPCR家族成员之一。开发的ELISA KIT灵敏度高、特异性强,适合于血液样本检测。

  • 伴随诊断应用:
    药物过敏反应的关键受体。GPCR家族成员之一。
  • 需求:MRGPRX2 检测,用于伴随诊断
  • 抗原:多种重组蛋白和多肽
  • 验证:重组蛋白和多肽
  • 筛选:ELISA配对,兔多抗-鼠单抗 双抗体夹心
Case 3

AFP抗体对及ELISA KIT合作开发
甲胎蛋白(AFP)是临床最常用的肿瘤指标之一。在原发性肝癌患者中有约60%以上的患者伴有不同程度的AFP升高。甲胎蛋白与肝癌及多种肿瘤的发生发展密切相关,在多种肿瘤中均可表现出较高浓度,可作为多种肿瘤的阳性检测指标。目前临床上主要作为原发性肝癌的血清标志物,用于原发性肝癌的诊断及疗效监测。开发的AFP鼠单抗抗体对特异性强、稳定性好、灵敏度高,检测限低至0.215ng/mL。

  • 需求:AFP诊断抗体对开发
  • 抗原:重组蛋白
  • 验证:重组蛋白
  • 筛选:ELISA配对,鼠单抗-鼠单抗配对

服务内容及周期

服务内容 服务说明 周期(周) 备注
免疫原制备 多肽合成、原核/ 真核系统表达蛋白 6-8 根据项目需求选择合适的免疫原
动物免疫 取免疫前动物血清进行背景检测,选择检测值较低的动物用于免疫
抗血清 ELISA 检测,数据提供给客户,同时提供抗血清给客户检测,由客户选择检测结果好的动物进行后续单克隆抗体筛选
8-10 根据项目需求免疫小鼠或者兔
鼠/ 兔单克隆抗体筛选 初筛出特异识别抗原的阳性克隆
进一步筛选识别内源样本的阳性克隆
11-20 根据客户的需求筛选
抗体配对测试 ELISA 配对测试及标曲建立
寄送配对成功的抗体对给客户试用
2-3 保证至少一对抗体可以满足需求
试剂盒开发 试剂盒反应条件及参数优化
标准曲线确定
稳定性评估等
3-4
试剂盒验证 灵敏度测定
批内差和批间差测定
添加回收测定
样品测定等
3-4
试剂盒生产 成品试剂盒生产(5 个) 2-3 如需更多试剂盒,另行商议
总计 35-52 根据客户需求产生浮动

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