编码微球
用两种不同的荧光染料对直径6um的聚苯乙烯微球进行染色,每种荧光有10种浓度,从而获得多达100种不同荧光编码的微球系列。微球偶联
把针对不同待测物质的抗体以共价交联的方式结合到特定编码微球上,达到每种荧光微球对应一个检测靶标。液相反应
把不同检测靶点的荧光编码微球进行混合,每颗微球会作为一个独立的反应载体,然后分阶段加入待测物、生物素标记的抗体、荧光素标记的藻红蛋白进行反应形成“三明治”夹心复合物。激光分析
基于流式原理,通过鞘液带动染色的微球在液流路中逐个循序通过,仪器中红色光源(635nm分类激光)测量微球内的染料,并识别微球编码和分析物种类,绿色光源(532nm报告激光)测量微球报告分子荧光强度,经分析处理,将荧光信号转化为定量浓度检测结果。提供结果:实验报告,包括标曲、荧光强度中位值及对应浓度、柱形图/曲线图(总体)等
服务周期:自收到样本之日起10-15个工作日(如样本量大,根据实际情况确定服务周期)
标准结果报告(部分展示案例)
标准曲线
原始测定数据表
MFI值 | ||||||||||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
编号 | IL-1 beta | IL-2 | IL-4 | IL-5 | IL-6 | IL-8 | IL-10 | IL-12 P70 | IL-17A | IFN-alpha | IFN-gamma | TNF-alpha |
S0 | 838 | 1028 | 738 | 1304 | 708 | 777 | 821 | 691 | 704 | 724 | 1120 | 860 |
S1 | 1010 | 1939 | 919 | 3868 | 7273 | 1161 | 1370 | 1034 | 1320 | 882 | 1438 | 1079 |
S2 | 1330 | 4150 | 1710 | 7920 | 18910 | 2506 | 3019 | 2365 | 3307 | 1167 | 2629 | 1302 |
S3 | 5299 | 10204 | 4118 | 20496 | 61805 | 7148 | 7904 | 7424 | 9975 | 2294 | 8328 | 3321 |
S4 | 29313 | 36395 | 10103 | 60497 | 159839 | 23148 | 21505 | 23270 | 29776 | 6452 | 37237 | 8885 |
S5 | 184010 | 136781 | 33744 | 175972 | 397675 | 104553 | 65968 | 69722 | 96296 | 21442 | 172726 | 29524 |
S6 | 593878 | 348393 | 92769 | 403472 | 866438 | 347108 | 164787 | 164021 | 216220 | 61457 | 428357 | 92194 |
S7 | 1266925 | 714862 | 214489 | 902575 | 1710696 | 952982 | 343829 | 277702 | 382832 | 180263 | 677552 | 297894 |
浓度值(pg/mL) | ||||||||||||
编号 | IL-1 beta | IL-2 | IL-4 | IL-5 | IL-6 | IL-8 | IL-10 | IL-12 P70 | IL-17A | IFN-alpha | IFN-gamma | TNF-alpha |
S0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 |
S1 | 6.9 | 1.4 | 0.7 | 1.4 | 1.4 | 2.7 | 1.4 | 6.9 | 6.9 | 0.7 | 4.1 | 1.4 |
S2 | 20.6 | 4.1 | 2.1 | 4.1 | 4.1 | 8.2 | 4.1 | 20.6 | 20.6 | 2.1 | 12.3 | 4.1 |
S3 | 61.7 | 12.3 | 6.2 | 12.3 | 12.3 | 24.7 | 12.3 | 61.7 | 61.7 | 6.2 | 37.0 | 12.3 |
S4 | 185.2 | 37.0 | 18.5 | 37.0 | 37.0 | 74.1 | 37.0 | 185.2 | 185.2 | 18.5 | 111.1 | 37.0 |
S5 | 555.6 | 111.1 | 55.6 | 111.1 | 111.1 | 222.2 | 111.1 | 555.6 | 555.6 | 55.6 | 333.3 | 111.1 |
S6 | 1666.7 | 333.3 | 166.7 | 333.3 | 333.3 | 666.7 | 333.3 | 1666.7 | 1666.7 | 166.7 | 1000.0 | 333.3 |
S7 | 5000 | 1000 | 500 | 1000 | 1000 | 2000 | 1000 | 5000 | 5000 | 500 | 3000 | 1000 |
种属 | 货号 | 因子数 | 检测因子 | 应用 |
---|---|---|---|---|
Human | RK04294 | 4 | IL-4、IL-6、IL-10、IFN-gamma | 免疫治疗、细胞因子 |
RK04295 | 7 | IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A、IFN-gamma、TNF-alpha | 免疫治疗 | |
RK04781 | 8 | GM-CSF、IFN-gamma、IL-6、IL-8、IL-10、CCL2、Tau(total)、beta-NGF | 细胞免疫治疗神经毒性评估 | |
RK04296 | 12 | IL-1beta、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12 p70、IL-17A、IFN-gamma、TNF-alpha、IFN-alpha | 细胞免疫治疗CRS评估 | |
RK04281 | 12 | GM-CSF、IFN-gamma、IL-1beta、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8/CXCL8、IL-10、IL-12 p70、TNF-alpha、VEGF/VEGF-A | 生长、增殖、调节感染、损伤及炎症、生殖及骨重建 | |
RK04350 | 21 | CD40 Ligand/TNFSF5、GM-CSF、Granzyme B、IFN-gamma、IL-10、IL-12 p70、IL-13、IL-15、IL-17/IL-17A、IL-1ra、IL-1alpha、IL-1beta、IL-2、IL-33、IL-4、IL-6、IL-8/CXCL8、MIP-1alpha / CCL3、MIP-1beta / CCL4、PD-L1/B7-H1、TNF-alpha | 免疫治疗、代谢、炎症 | |
RK04360 | 31 | CCL11/Eotaxin、CCL5/RANTES、CD40 Ligand/TNFSF5、EGF、Flt-3 Ligand/FLT3L、GM-CSF、Granzyme B、IFN-alpha、IFN-gamma、IL-10、IL-12 p70、IL-13、IL-15、IL-17/IL-17A、IL-1ra、IL-1alpha、IL-1beta、IL-2、IL-33、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8/CXCL8、MIP-1alpha / CCL3、MIP-1beta / CCL4、MIP-3alpha / CCL20、MIP-3beta / CCL19、PD-L1/B7-H1、TNF-alpha、VEGF/VEGF-A | 感染、免疫治疗、损伤、炎症、生殖、骨重建 | |
Mouse | RK04780 | 7 | CXCL1、G-CSF、IL-1beta、IL-6、TNF-alpha、VCAM-1、IFN-gamma | 炎症因子、肿瘤免疫 |
RK04778 | 8 | IL-1beta、IL-2、IL-4、IL-6、IL-12 p70、TNF-alpha、IFN-gamma、IL-17A | 炎症因子 | |
RK04777 | 8 | IFN-gamma、IL-1alpha、IL-1beta、IL-6、IL-10、TNF-alpha、MCP-1、MIP-1alpha | 炎症因子、免疫治疗、损伤 | |
RK04776 | 9 | IL-2、IL-4、IL-10、IL-13、IL-17A、IL-6、IL-1beta、IFN-gamma、TNF-alpha | T细胞亚群 | |
RK04775 | 10 | CCL4、CCL5/Rantes、CXCL1/KC、IFN-gamma、IL-1alpha、IL-1beta、IL-10、IL-18、IL-6、TNF-alpha | 细胞因子、巨噬细胞亚群 | |
RK04396 | 23 | CCL11、CCL4、CCL5 /RANTES 、CXCL1/KC、G-CSF、GM-CSF、IFN-gamma、IL-10、IL-12 p70、IL-13、IL-17A、IL-1alpha、IL-1beta、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、MCP-1 / CCL2、MIP-1alpha/CCL3、M-CSF、TNF-alpha | 炎症因子、趋化因子、肿瘤免疫 | |
Rat | RK04837 | 10 | CXCL1/KC、GM-CSF、IFN-gamma、IL-10、IL-1alpha、IL-1beta、IL-4、MIP-1alpha /CCL3、TNF-alpha、VEGF/VEGF-A | 细胞因子 |
种属:Human | |||
---|---|---|---|
alpha-Fetoprotein/AFP | CX3CL1/Fractalkine | IL-2R | Oncostatin M/OSM |
Amyloid beta 40 | CXCL10/IP-10/CRG-2 | IL-3 | P-Cadherin |
Amyloid beta 42 | CXCL11/I-TAC | IL-4 | PDGF-AA |
B7-1/CD80 Fc Chimera | CXCL9/MIG | IL-5 | PDGF-BB |
beta-NGF | Cystatin C | IL-6 | PD-L1/B7-H1/ CD274 |
CCL11/Eotaxin | EGF | IL-7 | RAGE/AGER |
CCL19/MIP-3 beta | Endoglin/CD105 | IL-8/CXCL8 | Resistin |
CCL2/MCP-1 | FGF basic/FGF2/bFGF | IL-10 | Retinol-Binding Protein 4/RBP4 |
CCL20/MIP-3 alpha | Flt-3 Ligand/FLT3L | IL-12 p70 | S100A8 |
CCL27/CTACK | Gal-3/LGALS3 | IL-12/IL-23 p40 | SCF/c-kit Ligand |
CCL3/MIP-1 alpha | G-CSF | IL-13 | sE-Selectin/CD62E |
CCL4/MIP-1 beta | GFAP | IL-15 | Siglec-5 |
CCL5/RANTES | GM-CSF | IL-16 | sST2 |
CCL7/MCP-3 | Granzyme B | IL-17/IL-17A | Tau (total) |
CCL8/MCP-2 | HE4/WFDC2 | IL-17F | TGF-beta1 |
CD14 | HGF | IL-18 | TIMP-3 |
CD152 | ICAM-1/CD54 | IL-22 | TNF-alpha |
CD40 Ligand/TNFSF5 | IFN-alpha | IL-33 | TNF-R1 |
CD40/TNFRSF5 | IFN-beta | Leptin | TRAIL/TNFSF10 |
CD69 | IFN-gamma | LIF | TWEAK/TNFSF12 |
CEACAM5 | IL-1 alpha | LOX-1/OLR1 | uPAR |
CFD | IL-1 beta | M-CSF | VCAM-1/CD106 |
CHI3L1 | IL-1ra | MMP-9 | VEGF/VEGFA |
cTn-I/TNNI3 | IL-2 | NEFL/NFL | VEGF121 |
种属:Mouse | |||
Adiponectin/Acrp30 | GM-CSF | IL-5 | IL-18 |
CCL11/Eotaxin | IFN-beta | IL-6 | M-CSF |
CCL2/MCP-1 | IFN-gamma | IL-9 | TNF-alpha |
CCL3/MIP-1 alpha | IL-1 alpha | IL-10 | |
CCL4/MIP-1 beta | IL-1 beta | IL-12 p70 | |
CCL5/RANTES | IL-2 | IL-12/IL-23 p40 | |
CXCL1/KC | IL-3 | IL-13 | |
G-CSF | IL-4 | IL-17/IL-17A | |
种属:Rat | |||
CCL3/MIP-1α | IFN-gamma | IL-4 | VEGF/VEGFA |
CXCL1/KC | IL-1alpha | IL-10 | |
GM-CSF | IL-1beta | TNF-alpha |
对于新发现的靶点或市面上没有成熟的商业化抗体对的靶点,ABclonal基于独立知识产权的单B细胞培养和筛选的单克隆抗体技术平台SMab®,采用创新的细胞分选、富集及生物信息学等技术,直接从B细胞中获得理想的兔单克隆抗体,并经过严格配对筛选,最终获得特异性强、灵敏度高和稳定性好的抗体对,并应用于多指标流式联合分析试剂盒的个性定制开发服务。
Q1:多指标流式联合分析系统的服务优势?
通量高:一次反应可实现多达50种靶标检测;
样本用量少:50ul的液质样本(如血清、血浆、细胞上清等);
多功能性:可以对不同研究和应用领域、不同功能群组的靶标组合进行联合分析;
灵敏度高:蛋白检测下限可达0.1pg/mL;
线性范围广:检测线性范围高于传统ELISA技术;
重复性好:均相反应,测试结果之间CV值<10%;
灵活性高:可以根据需要对待測指标组合进行合理调整,实现个性化定制paneL。
Q2:多指标流式联合分析系统能给客户解决什么烦恼?
试剂盒灵敏度不够、检测样本量不够、检测指标数量庞大。
Q3:多指标流式联合分析系统常应用在哪些领域?
免疫学检测∶细胞因子、趋化因子、生长因子、激素、外泌体;
蛋白功能分析∶共表达蛋白谱分析、蛋白相互作用分析、蛋白组学研究、蛋白修饰分析等;
疾病标志物分析∶肿瘤标志物、代谢与心血管疾病标志物、神经系统疾病标志物;
药物筛选∶高通量药物筛选、动物模型研究。
Q4:多指标流式联合分析系统原理是什么?
多指标流式联合分析系统是基于微孔板的多重液相芯片技术,将高特异性捕获抗体包被到不同荧光编码的微珠上,预包被的微球与待检样本预混孵育时,目标物被微球上高特异性抗体捕获,接着加入生物素标记的高亲和配对检测抗体,最后加入PE标记的链霉亲和素,利用梯度稀释的标准品构建标准曲线,通过荧光信号检测,实现对样本中靶标的定量检测。由于不同微球在一定程度上可自由组合,因此可以实现对多种靶标的同时定量检测。
Q5:微球是如何实现多种荧光编码的?
荧光编码微球由两种荧光染料按不同浓度配比,进而形成不同能级的荧光编码微球组合阵列,即多种荧光编码微球。
Q6:荧光编码微球稳定性如何?保存条件?保质期是多久?
稳定性相对较好,4度保存,保质期2-3年。
Q7:微球偶联抗体的原理?
采用羧基化的聚苯乙烯微球,表面拥有一亿个活化羧基基团,活化后的微球可以与蛋白抗体的氨基或核酸探针的氨基共价交联,从而形成微球偶联抗体。
Q8:多指标流式联合分析能否为分析物提供与目前ELISA测试相同的结果?
所有检测均经历了我们为ELISA进行的相同的开发、确认、制造和质量控制标准化流程。每批多指标检测试剂盒以及ELISA检测试剂盒均完全适用相应的样品类型(即物种特异性血清、血浆和细胞培养上清液),因此,使用ELISA定量样品中多种分析物的研究完全可以使用进行,并且后者可以获得更高的分析效率、经济效益和性能。
Q9:多指标流式联合分析是如何实现在一个孔中同时对多个靶标进行分析检测的?
一个颜色的微球来作为某一靶标对应抗体的专属载体,即每种微球用一种捕获抗体包被以用于一种特定分析物的检测,不同的微球包被不同的抗体,然后将多种分析物特异性微珠在96孔检测板的单个孔中混合,最后使用多指标流式联合分析系统同时对多个靶进行检测和定量。
Q10:如何考虑多指标流式联合分析重复实验的问题?
我们每次都会对使用的标准品做重复性测定,同时也建议对每份样本进行重复2次测定,即做复孔。
Q11:多指标联合分析试剂盒内的靶点可以自由组合吗?若找不到合适的试剂盒,可以定制吗?
建议优先选用固定Panel,也可以根据您的实验和试剂盒情况综合评定是否可以自由组合;对于新发现的靶点或市面没有成熟商品化试剂盒情况,ABclonal可以提供抗体对及试剂盒开发服务。
Q12:做多指标流式联合分析服务,若样本数量少,可以拼单吗?
可以拼单,但拼单成功的周期比较长。
Q13:关于提供的样本量
预实验做两个孔,每个孔提供100ul的样本,细胞量没有要求,正式实验每个孔提供50ul。
Q14:做多指标流式联合分析服务,样本收集以后怎么保存,如何运输?
建议保存于-80度,避免反复冻融;采用干冰运输。
Q15:多指标流式联合分析服务周期是多久?
试剂盒以及样本收到之后10-15个工作日(若客户样本量大,根据实际情况确定实验周期)。