ABclonal根据市场需求,基于革命性的第四代重组兔单抗技术,研发出高特异性和高灵敏度及批间差异小的流式抗体,可实现高重复性、高可靠性且低背景的细胞分析或细胞分选,ABclonal提供即用型荧光素偶联标记抗体,同时也提供未标记抗体以便您自行定制实验。
拥有独立知识产权的基于新一代单B细胞筛选和培养的单克隆抗体开发平台,以ISO9001和ISO13485质量管理体系标准严格生产,批间一致性更高。
抗体在筛选以及偶联成功后均经过阳性样本和阴性样本全面验证, 信号跃迁明显,无杂峰。
每一支直标抗体均经过滴度测试,推荐最佳的抗体用量,减少客户检测条件摸索。
应用:FC
种属:Human
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01细胞计数:将培养好的细胞收集于50mL离心管中并计数;500 g离心4min,去上清;
02制备单细胞悬液:将收集的细胞用 1mL 0.5% BSA/PBS溶液重悬,400 g离心3 min,去上清,重复2次;用0.5% BSA/PBS溶液重悬细胞,分配到96孔板中,每孔50 μL细胞悬液;
03一抗孵育:每孔加入一抗稀释液50μL。振荡,室温反应20 min;
04洗涤:400g离心5min,去上清;
05二抗孵育:如非荧光染料直标抗体加入100 μL 荧光二抗 ,重悬避光振荡,室温反应20 min;直标荧光抗体直接跳转到步骤8;
06以400g的速度离心5分钟,去上清;
07洗涤:加入200μL0.5% BSA/PBS重悬,400g离心5 min,去上清,重复两遍;
08用200 μL 0.5%BSA/PBS重悬细胞,上机分析。
01将培养好的细胞收集于50 mL离心管中并计数;500 g离心4 min,去上清;
02将收集的细胞用1mL 0.5% BSA/PBS溶液重悬,400 g离心3 min,弃上清,用 0.5% BSA/PBS溶液重悬细胞,按设计方案对应96孔板中每孔加100 μL细胞悬液,离心,去上清;
03Live/Dead (Zombie NIR)染色,L/D staining solution 用1×PBS按1:1500的比例稀释,按设计将L/Dstaining solution分配到96孔V型板里,每孔100 μL,重悬每孔中的细胞,混合,避光室温孵育15 min;
04400g离心5min,弃上清,用FACS buffer洗2次,按设计将1X Intracellular Fixation buffer分配到96孔V型板里,每孔100μL,重悬每孔中的细胞,混合 ,避光室温孵育30min;
05400g离心5min,弃上清,用1X Permeablization buffer洗2次,按设计将用1X Perm buffer稀释好的一抗分配到96孔V型板里,每孔100μL,重悬每孔中的细胞,混合,避光室温孵育30 min;
06400g离心5min,去上清,用1X Permeablization buffer洗2次;
07按设计将用1X Permeablization buffer 稀释好的荧光二抗分配到96孔V型板里,每孔100μL,重悬每孔中的细胞,混合,避光室温孵育30 min;直标荧光抗体直接跳转到步骤9;;
08400g离心5min,去上清,用1X Permeablization buffer洗2次;
09用200μL FACS buffer重悬细胞,上机分析。