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USP30, a member of the ubiquitin-specific protease family (see USP1, MIM 603478), is a novel mitochondrial deubiquitinating (DUB) enzyme (Nakamura and Hirose, 2008 [PubMed 18287522]).
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首先,一般抗体不推荐客户回收利用,抗体使用之后缓冲体系已经发生改变,不同客户在回收抗体的保存条件上也会有差异,所以抗体回收使用效果无法保证。另外,ABclonal公司也做过一批抗体回收验证测试,测试结果显示不同抗体可回收次数不同,一般效价越高的抗体,可重复使用的次数越多,客户可根据实验情况来确定。
注:我们将孵育完毕后剩余的抗体回收到离心管中置于4℃保存,效价高的抗体可至少保存1周,至少重复利用3次。
武汉爱博泰克生物(ABclonal)科技有限公司是国产品牌,她成立于2011年,公司依托ABclonal美国波士顿抗体与蛋白研发中心、中国光谷生物城(武汉)抗体生产基地以及上海张江分子酶研发中心,凝聚了十余位来自哈佛大学、麻省理工、复旦大学、上海交大、中科院生化细胞所和武汉大学的全球知名分子和免疫学方面博士,组成我们的科学家团队,通过聚焦抗体与酶核心技术,致力于打破国际技术的垄断,将公司打造成为科研工具和诊断原料的国内领导品牌,乃至弯道超越国际巨头。 我们拥有包括兔多克隆抗体、小鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体的生产研发平台,同时也有包括WB,IHC,IF,IP,CHIP在内的检测平台,我们对每一支自产的抗体进行了严格的检测。当然,我们部分直销地区也可以帮客户代购进口品牌的产品。同时也有抗体定制服务。ABclonal抗体优势:1,严自检,保质量;2产品多,指标全;3,价格低,货期短。注:ABclonal抗体价格体系详情见附件
ABclonal抗体成分在平时工作当中,常会有客户咨询我们的抗体用的什么buffer进行保存,一般来说,我们的buffer的成分是:PBS含0.03%的proclin300、0.05%牛血清白蛋白、50%甘油;也有一些是PBS含0.03%的proclin300,50%甘油。防腐剂 Proclin 300活性成分主要是2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)。ProClin生物灭活剂能够迅速穿透细胞膜,抑制对细胞呼吸至关重要的特定酶,因此一接触微生物有机体就会立即抑制细胞活性。ProClin的多个特定毒性位点可以防止微生物产生高水平的耐药性。
一、实验仪器及试剂
二、实验步骤
(1)细胞收集
(2)总蛋白提取
(3)蛋白浓度测定(BCA法)
(1)制胶器安装
(2)凝胶配置
(3)上样
(4)电泳
(1)准备工作
(2)转膜
根据所使用的一抗种类,选择进行下述其中1项的具体步骤
(1)对于无偶联的一抗
(2)对于偶联有HRP的一抗
附表1:BSA标准品稀释
1mg/ml BSA(μl) | 稀释液(μl) | 对应的蛋白含量(mg/ml) |
---|---|---|
0 | 20 | 0 |
1 | 19 | 0.05 |
2 | 18 | 0.1 |
4 | 16 | 0.2 |
8 | 12 | 0.4 |
12 | 8 | 0.6 |
16 | 4 | 0.8 |
20 | 0 | 1 |
附表2:分离胶浓度的选择
分子量(kDa) | 分离胶浓度 |
---|---|
X≤10 | 15% |
10<X≤15 | 13.5% |
15<X≤25 | 12% |
25<X≤35 | 11% |
35<X≤40 | 10% |
40<X≤55 | 9% |
55<X≤70 | 8% |
70<X≤100 | 7% |
100<X | 6% |
附表3:分离胶配制
分离胶浓度 | 6% | 7% | 8% | 9% | 10% | 11% | 12% | 13.5% | 15% |
---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
去离子水(mL) | 5.3 | 4.9 | 4.6 | 4.3 | 4.0 | 3.65 | 3.3 | 2.8 | 2.3 |
30%丙烯酰胺 (mL) | 2 | 2.4 | 2.7 | 3.0 | 3.3 | 3.65 | 4.0 | 4.5 | 5.0 |
1.5M Tris-HCL(pH8.8) (mL) | 2.5 | ||||||||
10%SDS(mL) | 0.1 | ||||||||
10%AP(mL) | 0.1 | ||||||||
TEMED(mL) | 0.01 | ||||||||
总体积(mL) | 10 |
附表4:5%浓缩胶配方
5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | |
---|---|---|---|---|---|
去离子水(mL) | 1.1 | 2.1 | 2.7 | 3.4 | 4.1 |
30%丙烯酰胺 (mL) | 0.33 | 0.5 | 0.67 | 0.83 | 1.0 |
1.0M Tris-HCL(pH6.8) (mL) | 0.25 | 0.38 | 0.5 | 0.63 | 0.75 |
10%SDS(mL) | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 |
10%AP(mL) | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 |
TEMED(mL) | 0.002 | 0.003 | 0.004 | 0.005 | 0.006 |
总体积(mL) | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
附表5:转膜条件选择
分子量(kDa) | 建议转膜条件(湿转) |
---|---|
X≤10 | 恒流200mA,30min |
10<X≤15 | 恒流200mA,40min |
15<X≤20 | 恒流200mA,50min |
20<X≤50 | 恒流200mA, 1kDa/min+20min |
50<X≤100 | 恒流200mA, 1kDa/min+30min |
100<X≤150 | 恒流250mA, 1kDa/min+20min |
150<X≤180 | 恒流270mA, 1kDa/min(时间控制在3h内) |
180<X | 恒流270mA, 1kDa/min(时间控制在4h内) |
一、实验仪器及试剂
4℃冰箱、恒温恒湿箱、通风橱、移液器、避光孵育湿盒。
二、实验步骤
一、实验仪器及试剂
微波炉、4℃冰箱、恒温恒湿箱、烘箱、移液器、避光孵育湿盒、抗原修复盒。
二、实验步骤