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Immunohistochemistry analysis of paraffin-embedded human lung cancer using p75NTR/NGFR Rabbit mAb (A19088) at dilution of 1:100 (40x lens).Perform microwave antigen retrieval with 10 mM PBS buffer pH 7.2 before commencing with IHC staining protocol.

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货号: A19088
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详细信息

推荐稀释比
  • IHC-P1:50 - 1:200
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反应物种
Human
同种型
IgG
克隆号
ARC0284
产品形式
Liquid
偶联物
Unconjugated
存储缓冲液
Store at -20℃. Avoid freeze / thaw cycles.
Buffer: PBS with 0.02% sodium azide,0.05% BSA,50% glycerol,pH7.3.
细胞定位
Membrane,Single-pass type I membrane protein
纯化方式
Affinity purification

抗原信息

免疫原
A synthetic peptide corresponding to a sequence within amino acids 300-400 of human p75 NGF Receptor (P08138).
序列
KLHSDSGISVDSQSLHDQQPHTQTASGQALKGDGGLYSSLPPAKREEVEKLLNGSAGDTWRHLAGELGYQPEHIDSFTHEACPVRALLASWATQDSATLDA

背景信息

Nerve growth factor receptor contains an extracellular domain containing four 40-amino acid repeats with 6 cysteine residues at conserved positions followed by a serine/threonine-rich region, a single transmembrane domain, and a 155-amino acid cytoplasmic domain. The cysteine-rich region contains the nerve growth factor binding domain.

关联靶点

NGFR为关键词搜索文献记录,得到上述基因与NGFR的研究紧密相关,排序顺序根据研究相关程度由高到低决定。(所显示数字代表两者共同出现的已发表文献数量)
1/

关联领域

NGFR为关键词搜索文献记录,得到上述相关热词信息,可反映出NGFR的研究趋势与热点。(关联领域与基因名称的距离代表其研究热度)

* 该数据来源于赛特新思(citexs.com)
来自于发表文献,仅供参考所用,ABclonal不承担任何责任。

暂无以NGFR为关键词搜索的文献记录。

该服务由赛特新思提供,上述关联分析来自已发表文献,仅供参考所用,ABclonal不承担任何责任。

ABclonal公司的抗体,可以回收利用几次?

首先,一般抗体不推荐客户回收利用,抗体使用之后缓冲体系已经发生改变,不同客户在回收抗体的保存条件上也会有差异,所以抗体回收使用效果无法保证。另外,ABclonal公司也做过一批抗体回收验证测试,测试结果显示不同抗体可回收次数不同,一般效价越高的抗体,可重复使用的次数越多,客户可根据实验情况来确定。
注:我们将孵育完毕后剩余的抗体回收到离心管中置于4℃保存,效价高的抗体可至少保存1周,至少重复利用3次。

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ABclonal作为国产抗体品牌的优势?

武汉爱博泰克生物(ABclonal)科技有限公司是国产品牌,她成立于2011年,公司依托ABclonal美国波士顿抗体与蛋白研发中心、中国光谷生物城(武汉)抗体生产基地以及上海张江分子酶研发中心,凝聚了十余位来自哈佛大学、麻省理工、复旦大学、上海交大、中科院生化细胞所和武汉大学的全球知名分子和免疫学方面博士,组成我们的科学家团队,通过聚焦抗体与酶核心技术,致力于打破国际技术的垄断,将公司打造成为科研工具和诊断原料的国内领导品牌,乃至弯道超越国际巨头。 我们拥有包括兔多克隆抗体、小鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体的生产研发平台,同时也有包括WB,IHC,IF,IP,CHIP在内的检测平台,我们对每一支自产的抗体进行了严格的检测。当然,我们部分直销地区也可以帮客户代购进口品牌的产品。同时也有抗体定制服务。ABclonal抗体优势:1,严自检,保质量;2产品多,指标全;3,价格低,货期短。注:ABclonal抗体价格体系详情见附件

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ABclonal抗体成分?

ABclonal抗体成分在平时工作当中,常会有客户咨询我们的抗体用的什么buffer进行保存,一般来说,我们的buffer的成分是:PBS含0.03%的proclin300、0.05%牛血清白蛋白、50%甘油;也有一些是PBS含0.03%的proclin300,50%甘油。防腐剂 Proclin 300活性成分主要是2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(MCI)和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮(CMCI)。ProClin生物灭活剂能够迅速穿透细胞膜,抑制对细胞呼吸至关重要的特定酶,因此一接触微生物有机体就会立即抑制细胞活性。ProClin的多个特定毒性位点可以防止微生物产生高水平的耐药性。

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实验方案

折叠内容
IHC-P

IHC-P免疫组织化学标准操作流程(石蜡切片——非磷酸化项目检测)

一、实验仪器及试剂

1、实验器材

电磁炉、压力锅、4℃冰箱、恒温恒湿箱、烘箱、光学显微镜、移液器、孵育湿盒、抗原修复盒。

2、实验试剂
  • (1) 缓冲液:0.01M PBS pH7.2±0.2; 0.01M pH7.2 PBST;
  • (2) 修复液(可选):
    pH6.0 0.01M柠檬酸修复液(1L):C6H8O7•H2O 0.4g;NaC6H5O7•2H2O 3g;pH6.0;
    pH9.0 0.01M Tris-EDTA修复液(1L):C4H11NO3 1.21g;C10H14N2Na2O8•2H2O 0.37g;pH9.0。
  • (3) 3%过氧化氢(需新鲜配制,30% H2O2与dH2O体积比1:9);
  • (4) 抗体稀释液:1X PBS + 5% 正常血清 + 0.3% Triton™ X-100;
  • (5) EnVision Systems检测体系, HRP显色系统: HRP RABBIT/MOUSE及配套DAB显色液;
  • (6) 脱蜡液、无水乙醇(分析纯)、去离子水(dH2O)、苏木素、中性树胶封片剂。

二、实验步骤

1.脱蜡、水化:
  • (1)烤片:将石蜡切片按同一朝向放置在切片架上,将其放入65℃的恒温箱中烤片30分钟;同时将脱蜡液1缸一起放入65℃的恒温箱中;
  • (2)脱蜡至水:将石蜡切片连同切片架一起放入脱蜡液1缸中,再一起从恒温箱中取出置于常温,5分钟后,将切片取出浸入到常温脱蜡液2缸中,并按照脱蜡液2、脱蜡液3、无水乙醇1、无水乙醇2、95%乙醇、80%乙醇的顺序依次将石蜡切片放入缸中,每缸5分钟;用流水清洗切片5分钟
注意:流水清洗时水流不能直接对着切片;操作过程中需一直保持切片处于湿润状态。
2.内源性过氧化物酶灭活:
  • 将切片完全浸入到3%双氧水溶液中,室温,孵育10分钟;完成后流水清洗5分钟。
注意:内源性酶含量高的组织,可以延长灭活时间至15-20分钟;双氧水需新鲜配制,可提前5-10分钟配制3%的双氧水。
3.抗原修复(可选):
  • (1)方法一,低pH值高压热修复:在高压锅中,加入pH6.0柠檬酸抗原修复液,高火预热;待修复液沸腾后将切片置于其中,并完全浸泡组织,盖好锅盖,扣上压力阀,高火继续加热;待限压阀开始转动喷气后调至中火,同时开始计时3分钟;计时结束后离开热源,自来水冲洗(约15s),安全阀降落后开盖,待修复液温度降至室温后,用缓冲液PBST洗涤3次,每次1min。
  • (2)方法二,高pH值高压热修复:在高压锅中,加入pH9.0 EDTA抗原修复液,高火预热;待修复液沸腾后将切片置于其中,并完全浸泡组织,盖好锅盖,扣上压力阀,高火继续加热;待限压阀开始转动喷气后调至中火,同时开始计时2分钟;计时结束后离开热源,自来水冲洗(约15s),安全阀降落后开盖,待修复液温度降至室温后,用缓冲液PBS洗涤3次,每次1min。
注意:修复液需完全浸没切片上组织;修复过程中严禁打开仪器或中断运行程序;修复液可根据实验需求自行选用修复液;修复时间可根据组织前处理状态适当调整。
4.染色:
  • (1)擦干组织周围水分,用免疫组化疏水笔在组织周围划圈,PBST洗涤2次,每次1min。
  • (2)一抗孵育:甩干组织周围水分,在组织切片上滴加已稀释的一抗,水平放置于孵育湿盒中,于室温(25℃)孵育1.5小时;
  • (3)洗涤:去除抗体工作液,用缓冲液PBST洗涤3次,每次5分钟;
  • (4)二抗孵育:甩干组织周围水分,在组织切片上滴加二抗工作液,水平放置于孵育湿盒中,于室温(25℃)孵育30分钟;
  • (5)洗涤:去除切片上的二抗工作液,用缓冲液PBST洗涤3次,每次5分钟;
  • (6)显色:显色前5分钟,配置DAB显色工作液,C液:B液体积比1:50,充分混匀;在组织切片上滴加显色工作液,室温(25℃)孵育8分钟;
  • (7)洗涤:将切片浸入大量dH2O中即可终止显色,流水冲洗2分钟;
  • (8)复染:将切片浸入苏木素中浸泡20秒,再用流水清洗2分钟;
  • (9)返蓝:将切片浸入氨水中浸泡2min,返蓝2min,再用流水清洗2分钟。
注意:染色过程中需一直保持切片处于湿润状态;染色过程中所有试剂使用过程中均需保证完全覆盖切片上组织;不同二抗及检测系统敏感性不同,因此对应一抗最佳稀释比可能会有差异;不同厂家苏木素复染程序略有不同。
5.脱水、透明、封片:
  • (1)脱水:将清洗后的切片于无水乙醇中浸泡2次,每次1分钟;高温(55℃-60℃)下完全干燥;
  • (2)透明:将切片于二甲苯中浸入1次,每次1min;
  • (3)封片:在切片中心滴加适量中性树胶,并加盖盖玻片。
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