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重组兔单抗病理验证

Ki67 Rabbit mAb (A20018)

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Immunohistochemistry analysis of Ki67 in paraffin-embedded human cervix cancer using Ki67 Rabbit mAb (A20018) at dilution of 1:100 (40x lens).Perform high pressure antigen retrieval with 10 mM citrate buffer pH 6.0 before commencing with IHC staining protocol.

Immunohistochemistry analysis of Ki67 in paraffin-embedded human colon carcinoma using Ki67 Rabbit mAb (A20018) at dilution of 1:100 (40x lens).Perform high pressure antigen retrieval with 10 mM citrate buffer pH 6.0 before commencing with IHC staining protocol.

Confocal imaging of HeLa cells using Ki67 Rabbit mAb (A20018,dilution 1:100)(Red). The cells were counterstained with α-Tubulin Mouse mAb (AC012,dilution 1:400) (Green). DAPI was used for nuclear staining (blue). Objective: 60x.

All(3)|
货号: A20018
促销价：   ￥1400
货    期：现货产品
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文献引用 (15)

折叠内容

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详细信息

推荐稀释比
  • IHC-P1:50 - 1:200
  • IF/ICC1:50 - 1:200
浓度查询

请输入产品标签上的lot号，例如4000000001

反应物种
Human, Mouse, Rat
同种型
IgG
理论分子量
359kDa
实际分子量
Refer to figures
克隆号
ARC5050-01
产品形式
Liquid
存储缓冲液
Store at -20℃. Avoid freeze / thaw cycles.
Buffer: PBS with 0.05% proclin300,0.05% BSA,50% glycerol,pH7.3.
细胞定位
Chromosome,Nucleus,nucleolus
纯化方式
Affinity purification

抗原信息

免疫原
A synthetic peptide corresponding to a sequence within amino acids 1200-1300 of human Ki67 (NP_002408.3).
序列
LAGTLPGSKRQLQTPKEKAQALEDLAGFKELFQTPGHTEELVAAGKTTKIPCDSPQSDPVDTPTSTKQRPKRSIRKADVEGELLACRNLMPSAGKAMHTPK
进行序列比对

用户验证的应用

应用及物种
  • IF (Mus musculus , Homo sapiens)
  • IHC (Mus musculus , Homo sapiens)
  • IF/ICC (Homo sapiens)
  • WB (Mus musculus)

背景信息

Enables protein C-terminus binding activity. Involved in regulation of chromosome segregation and regulation of mitotic nuclear division. Located in chromosome; nuclear body; and nucleolus. Colocalizes with condensed chromosome. Implicated in Crohn's disease; breast cancer; human immunodeficiency virus infectious disease; and pancreatic cancer. Biomarker of several diseases, including Barrett's esophagus; autoimmune disease of musculoskeletal system (multiple); endocrine gland cancer (multiple); gastrointestinal system cancer (multiple); and interstitial cystitis.

RRID
AB_3065688
基因ID
4288
Swiss Prot
P46013
别名
KIA; MIB-; MIB-1; PPP1R105; Ki67
研究领域

关联靶点

以MKI67为关键词搜索文献记录，得到上述基因与MKI67的研究紧密相关，排序顺序根据研究相关程度由高到低决定。（所显示数字代表两者共同出现的已发表文献数量）
◀1/▶

关联领域

以MKI67为关键词搜索文献记录，得到上述相关热词信息，可反映出MKI67的研究趋势与热点。（关联领域与基因名称的距离代表其研究热度）

* 该数据来源于赛特新思(citexs.com)
来自于发表文献，仅供参考所用，ABclonal不承担任何责任。

暂无以MKI67为关键词搜索的文献记录。

该服务由赛特新思提供，上述关联分析来自已发表文献，仅供参考所用，ABclonal不承担任何责任。

FAQ

折叠内容

ABclonal公司的抗体，可以回收利用几次？

首先，一般抗体不推荐客户回收利用，抗体使用之后缓冲体系已经发生改变，不同客户在回收抗体的保存条件上也会有差异，所以抗体回收使用效果无法保证。另外，ABclonal公司也做过一批抗体回收验证测试，测试结果显示不同抗体可回收次数不同，一般效价越高的抗体，可重复使用的次数越多，客户可根据实验情况来确定。
注：我们将孵育完毕后剩余的抗体回收到离心管中置于4℃保存，效价高的抗体可至少保存1周，至少重复利用3次。

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ABclonal作为国产抗体品牌的优势？

武汉爱博泰克生物（ABclonal）科技有限公司是国产品牌，她成立于2011年，公司依托ABclonal美国波士顿抗体与蛋白研发中心、中国光谷生物城(武汉)抗体生产基地以及上海张江分子酶研发中心，凝聚了十余位来自哈佛大学、麻省理工、复旦大学、上海交大、中科院生化细胞所和武汉大学的全球知名分子和免疫学方面博士，组成我们的科学家团队，通过聚焦抗体与酶核心技术，致力于打破国际技术的垄断，将公司打造成为科研工具和诊断原料的国内领导品牌，乃至弯道超越国际巨头。 我们拥有包括兔多克隆抗体、小鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体的生产研发平台，同时也有包括WB,IHC,IF,IP,CHIP在内的检测平台，我们对每一支自产的抗体进行了严格的检测。当然，我们部分直销地区也可以帮客户代购进口品牌的产品。同时也有抗体定制服务。ABclonal抗体优势：1，严自检，保质量；2产品多，指标全；3，价格低，货期短。注：ABclonal抗体价格体系详情见附件

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ABclonal抗体成分？

ABclonal抗体成分在平时工作当中，常会有客户咨询我们的抗体用的什么buffer进行保存，一般来说，我们的buffer的成分是：PBS含0.03%的proclin300、0.05%牛血清白蛋白、50%甘油；也有一些是PBS含0.03%的proclin300，50%甘油。防腐剂 Proclin 300活性成分主要是2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（MCI）和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（CMCI）。ProClin生物灭活剂能够迅速穿透细胞膜，抑制对细胞呼吸至关重要的特定酶，因此一接触微生物有机体就会立即抑制细胞活性。ProClin的多个特定毒性位点可以防止微生物产生高水平的耐药性。

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实验方案

折叠内容
IHC-P

IHC-P免疫组织化学标准操作流程（石蜡切片——非磷酸化项目检测）

一、实验仪器及试剂

1、实验器材

电磁炉、压力锅、4℃冰箱、恒温恒湿箱、烘箱、光学显微镜、移液器、孵育湿盒、抗原修复盒。

2、实验试剂
  • (1) 缓冲液：0.01M PBS pH7.2±0.2; 0.01M pH7.2 PBST;
  • (2) 修复液（可选）：
    pH6.0 0.01M柠檬酸修复液（1L）：C6H8O7•H2O 0.4g；NaC6H5O7•2H2O 3g；pH6.0；
    pH9.0 0.01M Tris-EDTA修复液（1L）：C4H11NO3 1.21g；C10H14N2Na2O8•2H2O 0.37g；pH9.0。
  • (3) 3%过氧化氢（需新鲜配制，30% H2O2与dH2O体积比1:9）;
  • (4) 抗体稀释液：1X PBS + 5% 正常血清 + 0.3% Triton™ X-100;
  • (5) EnVision Systems检测体系, HRP显色系统： HRP RABBIT/MOUSE及配套DAB显色液;
  • (6) 脱蜡液、无水乙醇（分析纯）、去离子水（dH2O）、苏木素、中性树胶封片剂。

二、实验步骤

1．脱蜡、水化：
  • （1）烤片：将石蜡切片按同一朝向放置在切片架上，将其放入65℃的恒温箱中烤片30分钟；同时将脱蜡液1缸一起放入65℃的恒温箱中；
  • （2）脱蜡至水：将石蜡切片连同切片架一起放入脱蜡液1缸中,再一起从恒温箱中取出置于常温，5分钟后，将切片取出浸入到常温脱蜡液2缸中，并按照脱蜡液2、脱蜡液3、无水乙醇1、无水乙醇2、95%乙醇、80%乙醇的顺序依次将石蜡切片放入缸中，每缸5分钟；用流水清洗切片5分钟
注意：流水清洗时水流不能直接对着切片；操作过程中需一直保持切片处于湿润状态。
2．内源性过氧化物酶灭活：
  • 将切片完全浸入到3%双氧水溶液中，室温，孵育10分钟；完成后流水清洗5分钟。
注意：内源性酶含量高的组织，可以延长灭活时间至15-20分钟；双氧水需新鲜配制，可提前5-10分钟配制3%的双氧水。
3．抗原修复（可选）：
  • （1）方法一，低pH值高压热修复：在高压锅中，加入pH6.0柠檬酸抗原修复液，高火预热；待修复液沸腾后将切片置于其中，并完全浸泡组织，盖好锅盖，扣上压力阀，高火继续加热；待限压阀开始转动喷气后调至中火，同时开始计时3分钟；计时结束后离开热源，自来水冲洗（约15s），安全阀降落后开盖，待修复液温度降至室温后，用缓冲液PBST洗涤3次，每次1min。
  • （2）方法二，高pH值高压热修复：在高压锅中，加入pH9.0 EDTA抗原修复液，高火预热；待修复液沸腾后将切片置于其中，并完全浸泡组织，盖好锅盖，扣上压力阀，高火继续加热；待限压阀开始转动喷气后调至中火，同时开始计时2分钟；计时结束后离开热源，自来水冲洗（约15s），安全阀降落后开盖，待修复液温度降至室温后，用缓冲液PBS洗涤3次，每次1min。
注意：修复液需完全浸没切片上组织；修复过程中严禁打开仪器或中断运行程序；修复液可根据实验需求自行选用修复液；修复时间可根据组织前处理状态适当调整。
4．染色：
  • （1）擦干组织周围水分，用免疫组化疏水笔在组织周围划圈，PBST洗涤2次，每次1min。
  • （2）一抗孵育：甩干组织周围水分，在组织切片上滴加已稀释的一抗，水平放置于孵育湿盒中，于室温（25℃）孵育1.5小时；
  • （3）洗涤：去除抗体工作液，用缓冲液PBST洗涤3次，每次5分钟；
  • （4）二抗孵育：甩干组织周围水分，在组织切片上滴加二抗工作液，水平放置于孵育湿盒中，于室温（25℃）孵育30分钟；
  • （5）洗涤：去除切片上的二抗工作液，用缓冲液PBST洗涤3次，每次5分钟；
  • （6）显色：显色前5分钟，配置DAB显色工作液，C液:B液体积比1:50，充分混匀；在组织切片上滴加显色工作液，室温（25℃）孵育8分钟；
  • （7）洗涤：将切片浸入大量dH2O中即可终止显色，流水冲洗2分钟；
  • （8）复染：将切片浸入苏木素中浸泡20秒，再用流水清洗2分钟；
  • （9）返蓝：将切片浸入氨水中浸泡2min，返蓝2min，再用流水清洗2分钟。
注意：染色过程中需一直保持切片处于湿润状态；染色过程中所有试剂使用过程中均需保证完全覆盖切片上组织；不同二抗及检测系统敏感性不同，因此对应一抗最佳稀释比可能会有差异；不同厂家苏木素复染程序略有不同。
5．脱水、透明、封片：
  • （1）脱水：将清洗后的切片于无水乙醇中浸泡2次，每次1分钟；高温（55℃-60℃）下完全干燥；
  • （2）透明：将切片于二甲苯中浸入1次，每次1min；
  • （3）封片：在切片中心滴加适量中性树胶，并加盖盖玻片。
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IF/ICC

免疫荧光实验操作流程（细胞样本）

一、实验仪器及试剂

1、实验器材

4℃冰箱、恒温恒湿箱、通风橱、移液器、避光孵育湿盒。

2、实验试剂
  • (1) 缓冲液：0.01M pH7.2±0.2 TBS ；0.01M pH7.2±0.2 TBST
  • (2) 固定液：4%中性甲醛固定液（TBS缓冲液配制）
  • (3) 抗体稀释液：1X TBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100
  • (4) 通透剂：0.3% Triton X-100（TBS缓冲液配制）
  • (5) 二抗（可选）：
    使用兔源一抗可选二抗：
    Alexa Fluor 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)# AS074；
    Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)# AS073；
    使用鼠源一抗可选二抗
    Alexa Fluor 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)# AS077；
    Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)# AS076；
  • (6) 染核试剂：1mg/mL DAPI（用时使用0.01M pH7.2 TBS缓冲液配制）
  • (7) 去离子水（dH2O）、抗荧光衰减封片剂。

二、实验步骤

1．样本前处理
  • (1) 弃去培养基，在细胞上缓慢加入常温TBS，清洗2次，每次5秒；
  • (2) 细胞固定：在细胞上覆盖 4%中性甲醛固定液（TBS缓冲液配制），置于4℃，固定15min；固定液需足量；
  • (3) 固定液的清洗：去除固定液，使用4℃预冷的TBS缓冲液，漂洗3次，每次5分钟；
  • (4) 通透：对于细胞骨架，细胞器或细胞核定位蛋白，可增加通透步骤，使用冰甲醇冰上处理5-10min(可选)；
注意：需避免实验操作时温差过大或温度骤变；固定液需保证足量，可过量使用；甲醛有毒性，加固定液和固定后的清洗需在通风橱内操作。
2．染色步骤
  • （1）封闭：用5%空白山羊血清将样本完全覆盖，切片需放置于湿盒内，细胞孔板可直接将孔板密封好，置于37℃恒温恒湿培养箱孵育30min；
  • （2）一抗孵育：去除封闭液，直接在样本上滴加TBS缓冲液配制的一抗工作液，样本需完全覆盖，切片需放置于湿盒内，细胞孔板可直接将孔板密封好，置于4℃孵育过夜；
  • （3）复温：将样本置于常温，复温15min，去除抗体工作液，用缓冲液TBST洗涤1次，5分钟；用缓冲液TBS洗涤3次，每次5分钟；
  • （4）二抗孵育：在样本上滴加与一抗种属对应的荧光二抗工作液，样本需完全覆盖，避光，37℃，孵育1小时；去除二抗工作液，用缓冲液TBST洗涤1次，5分钟；用缓冲液TBS洗涤3次，每次5分钟；
  • （5）染核：在样本上滴加DAPI工作液，使用0.01M pH7.2±0.2 TBS缓冲液配制，DAPI溶液：TBS缓冲液体积比1:1000，避光，室温，孵育30分钟；去除DAPI工作液，用缓冲液TBST洗涤1次，5分钟；用缓冲液TBS洗涤3次，每次5分钟；
  • （6）细胞孔板可直接加入抗荧光衰减封片剂后，于荧光显微镜下观察并采集图像；细胞涂片滴加抗荧光衰减封片剂，然后加盖盖玻片封片，再于荧光显微镜下观察并采集图像；细胞爬片可取出，盖在滴加抗荧光衰减封片剂的载玻片上后，于荧光显微镜下观察并采集图像。
注意：实验中，所有试剂滴加应准确、快速、足量，不能出现干片的情况；染色步骤从二抗孵育开始，后续所有步骤都需注意避光操作；染色完成后需及时观察并采集图像，避免干燥和荧光物质淬灭。

免疫荧光实验操作流程（石蜡切片）

一、实验仪器及试剂

1、实验器材

微波炉、4℃冰箱、恒温恒湿箱、烘箱、移液器、避光孵育湿盒、抗原修复盒。

2、实验试剂
  • (1) 缓冲液：0.01M pH7.2±0.2 TBS ；0.01M pH7.2±0.2 TBST
  • (2) 修复液（可选）：
    pH6.0 0.01M柠檬酸修复液（1L）：C6H8O7•H2O 0.4g；NaC6H5O7•2H2O 3g；pH6.0；
    pH9.0 0.01M Tris-EDTA修复液（1L）：C4H11NO3 1.21g；C10H14N2Na2O8•2H2O 0.37g；pH9.0。
  • (3) 封闭液：5%空白山羊血清
  • (4) 抗体稀释液：1X TBS / 5% 正常血清 / 0.3% Triton™ X-100
  • (5) 二抗：
    使用兔源一抗可选二抗：
    Alexa Fluor 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)# AS074；
    Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)# AS073；
    使用鼠源一抗可选二抗：
    Alexa Fluor 594-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)# AS077；
    Alexa Fluor 488-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG (H+L)# AS076；
  • (6) 染核试剂：1mg/mL DAPI（用时使用0.01M pH7.2±0.2 TBS配制）
  • (7) 去离子水（dH2O）、抗荧光衰减封片剂。

二、实验步骤

1．水化/脱蜡：
  • (1) 烤片：将石蜡切片按同一朝向放置在切片架上，将其放入55℃的恒温箱中烤片30分钟；同时将脱蜡液1缸一起放入55℃的恒温箱中；
  • (2) 脱蜡至水：将石蜡切片连同切片架一起放入脱蜡液1缸中,再一起从恒温箱中取出置于常温，5分钟后，将切片取出浸入到常温脱蜡液2缸中，并按照脱蜡液2、脱蜡液3、无水乙醇1、无水乙醇2、95%乙醇的顺序依次将石蜡切片放入缸中，每缸5分钟；用流水清洗切片5分钟。
注意：流水清洗时水流不能直接对着切片；操作过程中需一直保持切片处于湿润状态。
2．抗原修复：
  • （1）方法一，微波热修复：将切片浸入盛有修复液的修复盒中，将抗原修复盒盖斜盖在修复盒上；整体放入微波炉中，高火加热3分钟后停火，微波炉内静置5分钟；再高火加热3分钟后停火，微波炉内静置5分钟；随后中低火加热1分钟后停火，微波炉内静置5分钟，然后将切片连同抗原修复盒拿出缓慢冷却至室温。
    注意：修复液需完全浸没切片上组织；修复过程中严禁打开微波炉门；修复完成后不可快速冷却；修复液可根据实验需求自行换用其他类型修复液。
  • （2）方法二，高压热修复：在高压锅中，加入抗原修复液，高火预热；待修复液沸腾后将切片置于其中，并完全浸泡组织，盖好锅盖，扣上压力阀，高火继续加热；待限压阀开始转动喷气后调至中火，同时开始计时3分钟；计时结束后离开热源，自然降压后将高压锅移入冷水中缓慢冷却。待修复液温度降至室温后，用缓冲液洗涤3次，每次1min。
    注意：修复液需完全浸没切片上组织；修复过程中严禁打开仪器或中断运行程序；修复液可根据实验需求自行换用其他类型修复液。
3．染色：
  • （1）封闭：用5%空白山羊血清将样本完全覆盖，切片需放置于湿盒内，置于37℃恒温恒湿培养箱孵育30min；
  • （2）一抗孵育：去除封闭液，直接在样本上滴加TBS缓冲液配制的一抗工作液，样本需完全覆盖，切片需放置于湿盒内，置于4℃孵育过夜；
  • （3）复温：将样本置于常温，复温15min，去除抗体工作液，用缓冲液TBST洗涤1次，5分钟；用缓冲液TBS洗涤3次，每次5分钟；
  • （4）二抗孵育：在样本上滴加与一抗种属对应的荧光二抗工作液，样本需完全覆盖，避光，37℃，孵育1小时；去除二抗工作液，用缓冲液TBST洗涤1次，5分钟；用缓冲液TBS洗涤3次，每次5分钟；
  • （5）染核：在样本上滴加DAPI工作液，使用0.01M pH7.2 TBS缓冲液配制，DAPI溶液：0.01M pH7.2 TBS缓冲液体积比1:1000，避光，室温，孵育30分钟；去除DAPI工作液，用缓冲液TBST洗涤1次，5分钟；用缓冲液TBS洗涤3次，每次5分钟；
  • （6）滴加抗荧光衰减封片剂，然后加盖盖玻片封片，再于荧光显微镜下观察并采集图像。
注意：实验中，所有试剂滴加应准确、快速、足量，不能出现干片的情况；染色步骤从二抗孵育开始，后续所有步骤都需注意避光操作；染色完成后需及时观察并采集图像，避免干燥和荧光物质淬灭。
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