Western blot analysis of extracts of various cell lines, using Moesin Rabbit mAb (A4915) at 1:1000 dilution.Secondary antibody: HRP Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) (AS014) at 1:10000 dilution.Lysates/proteins: 25μg per lane.Blocking buffer: 3% nonfat dry milk in TBST.Detection: ECL Basic Kit (RM00020).Exposure time: 1s.
Immunohistochemistry analysis of paraffin-embedded rat spleen using Moesin Rabbit mAb (A4915) at dilution of 1:100 (40x lens).Perform microwave antigen retrieval with 10 mM PBS buffer pH 7.2 before commencing with IHC staining protocol.
Immunohistochemistry analysis of paraffin-embedded human colon using Moesin Rabbit mAb (A4915) at dilution of 1:100 (40x lens).Perform microwave antigen retrieval with 10 mM PBS buffer pH 7.2 before commencing with IHC staining protocol.
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Moesin (for membrane-organizing extension spike protein) is a member of the ERM family which includes ezrin and radixin. ERM proteins appear to function as cross-linkers between plasma membranes and actin-based cytoskeletons. Moesin is localized to filopodia and other membranous protrusions that are important for cell-cell recognition and signaling and for cell movement.
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首先，一般抗体不推荐客户回收利用，抗体使用之后缓冲体系已经发生改变，不同客户在回收抗体的保存条件上也会有差异，所以抗体回收使用效果无法保证。另外，ABclonal公司也做过一批抗体回收验证测试，测试结果显示不同抗体可回收次数不同，一般效价越高的抗体，可重复使用的次数越多，客户可根据实验情况来确定。
注：我们将孵育完毕后剩余的抗体回收到离心管中置于4℃保存，效价高的抗体可至少保存1周，至少重复利用3次。
武汉爱博泰克生物（ABclonal）科技有限公司是国产品牌，她成立于2011年，公司依托ABclonal美国波士顿抗体与蛋白研发中心、中国光谷生物城(武汉)抗体生产基地以及上海张江分子酶研发中心，凝聚了十余位来自哈佛大学、麻省理工、复旦大学、上海交大、中科院生化细胞所和武汉大学的全球知名分子和免疫学方面博士，组成我们的科学家团队，通过聚焦抗体与酶核心技术，致力于打破国际技术的垄断，将公司打造成为科研工具和诊断原料的国内领导品牌，乃至弯道超越国际巨头。 我们拥有包括兔多克隆抗体、小鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体的生产研发平台，同时也有包括WB,IHC,IF,IP,CHIP在内的检测平台，我们对每一支自产的抗体进行了严格的检测。当然，我们部分直销地区也可以帮客户代购进口品牌的产品。同时也有抗体定制服务。ABclonal抗体优势：1，严自检，保质量；2产品多，指标全；3，价格低，货期短。注：ABclonal抗体价格体系详情见附件
ABclonal抗体成分在平时工作当中，常会有客户咨询我们的抗体用的什么buffer进行保存，一般来说，我们的buffer的成分是：PBS含0.03%的proclin300、0.05%牛血清白蛋白、50%甘油；也有一些是PBS含0.03%的proclin300，50%甘油。防腐剂 Proclin 300活性成分主要是2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（MCI）和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（CMCI）。ProClin生物灭活剂能够迅速穿透细胞膜，抑制对细胞呼吸至关重要的特定酶，因此一接触微生物有机体就会立即抑制细胞活性。ProClin的多个特定毒性位点可以防止微生物产生高水平的耐药性。
一、实验仪器及试剂
二、实验步骤
（1）细胞收集
（2）总蛋白提取
（3）蛋白浓度测定（BCA法）
（1）制胶器安装
（2）凝胶配置
（3）上样
（4）电泳
（1）准备工作
（2）转膜
根据所使用的一抗种类，选择进行下述其中1项的具体步骤
（1）对于无偶联的一抗
（2）对于偶联有HRP的一抗
附表1：BSA标准品稀释
| 1mg/ml BSA(μl) | 稀释液(μl) | 对应的蛋白含量（mg/ml） |
|---|---|---|
| 0 | 20 | 0 |
| 1 | 19 | 0.05 |
| 2 | 18 | 0.1 |
| 4 | 16 | 0.2 |
| 8 | 12 | 0.4 |
| 12 | 8 | 0.6 |
| 16 | 4 | 0.8 |
| 20 | 0 | 1 |
附表2：分离胶浓度的选择
| 分子量（kDa) | 分离胶浓度 |
|---|---|
| X≤10 | 15% |
| 10<X≤15 | 13.5% |
| 15<X≤25 | 12% |
| 25<X≤35 | 11% |
| 35<X≤40 | 10% |
| 40<X≤55 | 9% |
| 55<X≤70 | 8% |
| 70<X≤100 | 7% |
| 100<X | 6% |
附表3：分离胶配制
| 分离胶浓度 | 6% | 7% | 8% | 9% | 10% | 11% | 12% | 13.5% | 15% |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 去离子水（mL） | 5.3 | 4.9 | 4.6 | 4.3 | 4.0 | 3.65 | 3.3 | 2.8 | 2.3 |
| 30%丙烯酰胺 （mL） | 2 | 2.4 | 2.7 | 3.0 | 3.3 | 3.65 | 4.0 | 4.5 | 5.0 |
| 1.5M Tris-HCL(pH8.8) （mL） | 2.5 | ||||||||
| 10%SDS（mL） | 0.1 | ||||||||
| 10%AP（mL） | 0.1 | ||||||||
| TEMED（mL） | 0.01 | ||||||||
| 总体积（mL） | 10 |
附表4：5%浓缩胶配方
| 5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | 5%浓缩胶 | |
|---|---|---|---|---|---|
| 去离子水（mL） | 1.1 | 2.1 | 2.7 | 3.4 | 4.1 |
| 30%丙烯酰胺 （mL） | 0.33 | 0.5 | 0.67 | 0.83 | 1.0 |
| 1.0M Tris-HCL(pH6.8) （mL） | 0.25 | 0.38 | 0.5 | 0.63 | 0.75 |
| 10%SDS（mL） | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 |
| 10%AP（mL） | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 | 0.06 |
| TEMED（mL） | 0.002 | 0.003 | 0.004 | 0.005 | 0.006 |
| 总体积（mL） | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
附表5：转膜条件选择
| 分子量（kDa) | 建议转膜条件（湿转） |
|---|---|
| X≤10 | 恒流200mA,30min |
| 10<X≤15 | 恒流200mA,40min |
| 15<X≤20 | 恒流200mA,50min |
| 20<X≤50 | 恒流200mA, 1kDa/min+20min |
| 50<X≤100 | 恒流200mA, 1kDa/min+30min |
| 100<X≤150 | 恒流250mA, 1kDa/min+20min |
| 150<X≤180 | 恒流270mA, 1kDa/min(时间控制在3h内) |
| 180<X | 恒流270mA, 1kDa/min(时间控制在4h内) |
一、实验仪器及试剂
电磁炉、压力锅、4℃冰箱、恒温恒湿箱、烘箱、光学显微镜、移液器、孵育湿盒、抗原修复盒。
二、实验步骤
