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Magnetic Beads-conjugated Rabbit IgG isotype control (AC047)

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Immunoprecipitation analysis of 300 ug extract cell lysate from 293T cells transfected with GSK3B expression vector containing a C-terminal DDDDK tag (1x) with 30uL Magnetic Beads-conjugated Rabbit anti-DDDDK-tag mAb antibody（AE097). Magnetic Beads-conjugated Rabbit IgG isotype control mAb was used as a negative control（AC047 ). Western blot was performed from the immunoprecipitate using Mouse anti DDDDK-Tag mAb antibody (AE005) at 1:2000 dilution.Secondary antibody: HRP-conjugated AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG Light Chain (AS062).

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货号: AC047
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详细信息

推荐稀释比
  • IP30ul antibody (bead slurry) for 200μg-400μg extracts of whole cells
浓度查询

请输入产品标签上的lot号，例如4000000001

反应物种
同种型
IgG
克隆号
ARC5105-02-Beads
产品形式
Liquid
偶联物
Unconjugated
存储缓冲液
Store at 4℃. Avoid freeze / thaw cycles.
Buffer: PBS with 0.05% proclin300,pH7.3.
纯化方式
Protein A/G purification

抗原信息

免疫原
None
序列
Email for sequence
进行序列比对

背景信息

关联靶点

以IgG为关键词搜索文献记录，得到上述基因与IgG的研究紧密相关，排序顺序根据研究相关程度由高到低决定。（所显示数字代表两者共同出现的已发表文献数量）
◀1/▶

关联领域

以IgG为关键词搜索文献记录，得到上述相关热词信息，可反映出IgG的研究趋势与热点。（关联领域与基因名称的距离代表其研究热度）

* 该数据来源于赛特新思(citexs.com)
来自于发表文献，仅供参考所用，ABclonal不承担任何责任。

暂无以IgG为关键词搜索的文献记录。

该服务由赛特新思提供，上述关联分析来自已发表文献，仅供参考所用，ABclonal不承担任何责任。

FAQ

折叠内容

ABclonal公司的抗体，可以回收利用几次？

首先，一般抗体不推荐客户回收利用，抗体使用之后缓冲体系已经发生改变，不同客户在回收抗体的保存条件上也会有差异，所以抗体回收使用效果无法保证。另外，ABclonal公司也做过一批抗体回收验证测试，测试结果显示不同抗体可回收次数不同，一般效价越高的抗体，可重复使用的次数越多，客户可根据实验情况来确定。
注：我们将孵育完毕后剩余的抗体回收到离心管中置于4℃保存，效价高的抗体可至少保存1周，至少重复利用3次。

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ABclonal作为国产抗体品牌的优势？

武汉爱博泰克生物（ABclonal）科技有限公司是国产品牌，她成立于2011年，公司依托ABclonal美国波士顿抗体与蛋白研发中心、中国光谷生物城(武汉)抗体生产基地以及上海张江分子酶研发中心，凝聚了十余位来自哈佛大学、麻省理工、复旦大学、上海交大、中科院生化细胞所和武汉大学的全球知名分子和免疫学方面博士，组成我们的科学家团队，通过聚焦抗体与酶核心技术，致力于打破国际技术的垄断，将公司打造成为科研工具和诊断原料的国内领导品牌，乃至弯道超越国际巨头。 我们拥有包括兔多克隆抗体、小鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体的生产研发平台，同时也有包括WB,IHC,IF,IP,CHIP在内的检测平台，我们对每一支自产的抗体进行了严格的检测。当然，我们部分直销地区也可以帮客户代购进口品牌的产品。同时也有抗体定制服务。ABclonal抗体优势：1，严自检，保质量；2产品多，指标全；3，价格低，货期短。注：ABclonal抗体价格体系详情见附件

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ABclonal抗体成分？

ABclonal抗体成分在平时工作当中，常会有客户咨询我们的抗体用的什么buffer进行保存，一般来说，我们的buffer的成分是：PBS含0.03%的proclin300、0.05%牛血清白蛋白、50%甘油；也有一些是PBS含0.03%的proclin300，50%甘油。防腐剂 Proclin 300活性成分主要是2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（MCI）和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（CMCI）。ProClin生物灭活剂能够迅速穿透细胞膜，抑制对细胞呼吸至关重要的特定酶，因此一接触微生物有机体就会立即抑制细胞活性。ProClin的多个特定毒性位点可以防止微生物产生高水平的耐药性。

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实验方案

折叠内容
IP

IP检测（磁珠偶联抗体）

一、实验试剂

  • （1）裂解液&洗杂液：Cell lysis buffer for IP (without inhibitors)（RM00022）
  • （2）蛋白酶抑制剂(RM02916)
  • （3）1×PBS 缓冲液(RM00012)
  • （4）5×loding buffer（RM00001）（使用时用去离子水稀释至工作浓度即可）
  • （5）洗脱液：0.1-0.2M甘氨酸，pH:2.5-3.1
  • （6）中和液：1M Tris-base pH:10.4

二、实验步骤

1、样本处理

（1）贴壁培养细胞

  • a. 去除贴壁细胞的培养液，用PBS或无血清培养基清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。
  • b. 107细胞加入1ml Cell lysis buffer for IP（已加入蛋白酶抑制剂）,移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。2-8℃旋转15min，20转/min。
  • c. 低温下超声1min。
  • d. 14000g，4℃离心10min，小心吸取上清。

（2）悬浮培养细胞

  • a. 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
  • b. 107细胞加入1ml Cell lysis buffer for IP（已加入蛋白酶抑制剂），移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。2-8℃旋转15min，20转/min，充分裂解后应无明显沉淀。
  • c. 低温下超声1min。
  • d. 14000g，4℃离心10min，小心吸取上清。

（3）组织样本

  • a. 把组织剪切成细小的碎片。
  • b. 取液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1~2min之内，以减少蛋白的降解,按照每100-200mg组织加入1ml Cell lysis buffer for IP（已加入蛋白酶抑制剂）。
  • c. 4℃旋转混匀裂解15min。
    （步骤b，c也可采用以下过程：每100-200mg组织加入1ml Cell lysis buffer for IP（已加入蛋白酶抑制剂）。低温下用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，过程尽量控制在1~2min之内，以减少蛋白的降解。）
  • d. 低温下超声2min。
  • e. 14000g，4℃离心10min，小心吸取上清
2、Beads预处理
  • （1）将Magnetic Beads颠倒或漩涡混匀（溶液无分层）。
  • （2）取30-40μl上述Magnetic Beads至新的EP管中，加入500ul 预冷的Cell lysis buffer for IP,用1ml移液器反复匀速吹打10次，至于磁力架上静止2min，去上清。重复2次，共洗涤3次。
3、结合蛋白
  • （1）将含有抗原的样品（通常300μl，总蛋白200-500μg或者纯化后蛋白20μg左右）加入已处理好的Magnetic Beads中，置于翻转混合仪4℃下反应2h或过夜。
  • （2）将上述完成孵育的复合物，至于磁力架上静止2min，去上清。
  • （3）加入500ul预冷的 Cell lysis buffer for IP (已加入蛋白酶抑制剂),用1ml移液器反复匀速吹打10次，至于磁力架上静止2min，去上清。重复3次，共洗涤4次。
4、抗原洗脱

（1）变性洗脱

此方法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。

  • a. Magnetic Beads去除上清后，向其中加入35μl 1X SDS-PAGE Loading Buffer混合均匀，95℃加热10min。
  • b. 磁力架上进行磁性分离，收集上清液进行SDS-PAGE检测。

（2）非变性洗脱

  • a. Magnetic Beads去除上清后加入50μl洗脱液，混合均匀，室温孵育5min。
  • b. 磁力架静置2min，收集上清液至新的EP管中。
  • c. 加入中和液中和至pH7.0-8.0。用于后期功能分析。
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