产品信息
产品简介
双荧光素酶报告基因检测试剂盒用于通过报告质粒转染细胞后检测Luciferin底物荧光强度以反映Luciferase表达量的方法，检测基因调控作用。先以萤光素（Luciferin）为底物检测萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase），后以腔肠素（Coelenterazine）为底物检测海肾荧光素酶（Renilla luciferase），实现双荧光素酶报告基因检测。双荧光素酶报告基因检测试剂盒可灵敏高效地检测受基因元件调控的Luciferase表达，通常将转录调控元件克隆于Luciferase的上游，或把3'UTR调控区克隆于Luciferase下游，转染细胞后进行相应的刺激物诱导，裂解细胞并测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性评价调控元件受刺激物诱导的作用强弱。Renilla luciferase的作用为校正转染效率的内参，以消除孔间细胞数量和转染效率的差异。
产品特点
- 1. 萤光信号强：用于弱启动子或低水平表达调控的检测；
- 2.检测范围宽：线性范围达8个数量级（R²>0.99）；
- 3.灵敏度高：检测灵敏度低至10-18 mol.
产品应用
基因调控检测
产品组成
| 产品编号 | 名称 | 规格（100 T） | 保存条件 |
| BRK0044-1 | 5×Passive Luciferase Lysis Buffer | 10 ml | -20℃ |
| BRK0044-2 | Firefly Luciferase Assay Buffer | 10 ml | -20℃ |
| BRK0044-3 | D-Luciferin | 2 mg | -20℃，避光 |
| BRK0044-4 | Renilla Luciferase Assay Buffer | 10 ml | -20℃，避光 |
| BRK0044-5 | 50×Coelenterazine | 200 μl | -20℃，避光 |
注意事项
- 1.测定时样品和试剂均需恢复至室温后再进行检测。
- 2.双萤光素酶报告基因载体的选择：①不同实验所需的载体具有一定差异性，如果要构建载体，需要注意有些载体没有启动子，需要自行插入启动子；②海肾报告基因质粒尽量选择中等强度的启动子。海肾基因的表达活性应显著高于对照组，同时不干扰萤火虫萤光素酶报告基因的表达。
- 3.检测操作注意事项：①预先设置好酶标仪检测程序，再开始进行加样。程序设置选择全波长，不要选择某一波长检测；②加样时间最好不要超过90 s。
- 4.荧光值低：①建议做预实验优化转染条件，建议在质粒上加GFP作为转染效率验证；可以适当减少裂解液用量来提高蛋白浓度，同时设置多个复孔，减少因低浓度造成的孔间差异。②本产品为闪光型检测试剂盒，加样完成后，需立即检测。
- 5.建议使用不透光的白色酶标板进行检测。
- 6.luciferase和Renilla质粒转染的比例一般为10:1，luciferase质粒转染量根据转染试剂说明书和相关文献确定，可以根据预实验具体情况合理调整比例。
- 其他注意详见说明书。
保存条件和运输
Store at -20℃. 1年.-20℃运输、干冰运输.
说明书
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