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在6孔细胞板中分别接种293T、HCT116、C6三种细胞,细胞密度为60%左右,分别使用HighGene转染试剂和两种市面同类产品进行细胞转染,GFP真核表达质粒用量均为2μg,细胞转染48小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
在6孔细胞板中接种293T和HeLa细胞,分别铺置三个复孔,细胞密度为80%左右,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg,HighGene转染试剂用量为4μL,细胞转染48小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
在6孔细胞板中分别接种293T和HeLa细胞,细胞密度为70%左右,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg,两种不同批次的HighGene转染试剂用量均为4μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。
在6孔细胞板中接种NIH3T3细胞或Neuro-2a细胞,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg,HighGene转染试剂用量为4μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。
在125mL摇瓶中接种30mL密度为1 x106 个/mL HEK293F或Sf9悬浮细胞,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为30μg,HighGene转染试剂用量为60μL,细胞转染48小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
在6孔细胞板中接种293T细胞,细胞密度为70%左右,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg, HighGene转染试剂用量为4 μL,细胞转染16、36、48h后,在荧光显微镜下观察并拍照。
在96孔板中接种HEK293T、HeLa、HCT116细胞,每孔接种5000个细胞,细胞密度为50%左右,5个复孔,使用2μL/mL剂量HighGene转染试剂分别处理细胞24h和48h,然后使用CCK8试剂检测细胞的活性。
在96孔板中接种HEK293T、HeLa、HCT116细胞,每孔接种10000个细胞,细胞密度为70%左右,5个复孔,分别使用0、4μL/mL、 8μL/mL、16μL/mL剂量的HighGene转染试剂处理细胞24h,然后在光学显微镜下观察并拍照。
在6孔细胞板中接种293T和HeLa细胞,细胞密度为80%左右,细胞转染时,Cy3 siRNA用量为100pmol,HighGene转染试剂用量为5μL,或YAP1 siRNA用量为200pmol,HighGene转染试剂用量为5μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照(A),或制备细胞样本进行WB实验,YAP1抗体选用ABclonal A1002(B)。
在6孔细胞板中接种293T细胞,细胞密度为80%,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg,Cherry真核表达质粒用量为2μg ,HighGene转染试剂用量为8μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。
在6孔板中接种HeLa细胞,细胞密度为80%左右,细胞转染时,GFP真核表达质粒用量为2μg, HighGene转染试剂用量为4μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。反复冻融和37℃处理不影响HighGene转染试剂的细胞转染活性。备注:HighGene转染试剂分别冻融1~5次处理和37℃放置1~5天处理。
在6孔细胞板中接种HepG2细胞,分别在贴壁状态和悬浮状态进行细胞转染,GFP真核表达质粒用量为2μg,HighGene转染试剂用量为4μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。难转染细胞消化悬浮后可在一定程度上提高转染效率。
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货号: RM09014
促销价:   ¥900.00
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产品描述

HighGene转染试剂是一种新型高效的阳离子聚合物。它可以与核酸(包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸)相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内,适用于大部分真核细胞的细胞转染。

产品优势

大量试验测试表明,与常规转染试剂产品相比,HighGene转染试剂具有以下优势:

  • (1)转染效率较高。
  • (2)批次稳定,实验重复性好。
  • (3)对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。
  • (4)无明显细胞毒性。
  • (5)适用于siRNA细胞转染。
  • (6)HighGene转染试剂适用于质粒共转染。
  • (7)HighGene转染试剂适用于慢病毒包装及感染实验。

产品内部验证

验证细胞系HeLa、HEK293T、293T、HUVEC、HepG2、HEK293、CNE2、SW480、HEK293FT、HT29、Raw264.7、THP-1、HCT116
储存条件2-8℃储存,保质期两年

客户验证

验证细胞系HEK293T、HCT116、HeLa、A549、C6、HEK293F、Sf9、U87MG、HepG2、MCF-7、U2OS、NIH3T3、Huh-7

操作流程

贴壁细胞转染
(以293T细胞为例)
  • 1、第一天,将293T细胞接种到6孔板中,细胞密度控制在70%-90%为宜;
    注:根据实验需求,可以选择不同的细胞培养装置,细胞接种数量和所需培养液体积详见附表1
  • 2、第二天,先取4μg质粒加入到盛有200μL无血清DMEM基础培养基离心管中,吹打混合均匀,然后加入8μL HighGene转染试剂,吹打混合;
    注: MEM、1640、F12等基础培养基均可用于HighGene转染试剂的溶剂,不同的细胞培养装置所需质粒的量和HighGene转染试剂剂量详见附表2
  • 3、将200μL 质粒/HighGene转染试剂复合物均匀滴加到6孔细胞培养板孔中,轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布;
    注:6孔板中为完全培养基,轻轻晃动细胞培养板即可,切勿剧烈摇动细胞培养板,以免细胞脱落漂浮!
  • 4、细胞转染4-6小时后,半量更换新鲜完全培养基;
    注:半量换液时,吸弃一半原有完全培养基,补加一半新鲜完全培养基
  • 5、细胞转染24~48小时后,即可使用适当方式进行检测,如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等,或加入相应筛选药物(G418或Puromycin)可获得稳定细胞株。
悬浮细胞转染
(以HEK293F细胞为例)
  • 1、第一天,在125mL摇瓶中接种30mL密度为1×106个/mL HEK293F悬浮细胞;
  • 2、第二天,先取30μg质粒加入到盛有3 mL无血清DMEM基础培养基离心管中,吹打混合均匀,然后加入60μL HighGene转染试剂,吹打混合均匀;
  • 3、将3mL质粒/HighGene转染试剂复合物均匀滴加到盛有30mL HEK293F悬浮细胞的125mL摇瓶中,轻轻摇动摇瓶使其混合均匀;
  • 4、细胞转染3~5天后,根据蛋白表达的情况(胞内表达或分泌表达),收集细胞或细胞培养上清,进行后续蛋白纯化操作。
siRNA细胞转染
(以HeLa细胞为例)
  • 1、第一天,将HeLa细胞接种到6孔板中,细胞密度控制在70-90%为宜;
  • 2、第二天,先取100pmol siRNA加入到盛有200μL无血清DMEM基础培养基离心管中,吹打混合均匀,然后加入5μL HighGene转染试剂,吹打混合均匀;
    注:不同的细胞培养装置所需siRNA的量和HighGene转染试剂剂量详见附表3
  • 3、将200μL质粒/ HighGene转染试剂复合物均匀滴加到6孔细胞培养板孔中,轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布;
    注:6孔板中为完全培养基,轻轻晃动细胞培养板即可,切勿剧烈摇动细胞培养板,以免细胞脱落漂浮!
  • 4、细胞转染4-6小时后,半量更换新鲜完全培养基;
    注:半量换液时,吸弃一半原有完全培养基,补加一半新鲜完全培养基
  • 5、细胞转染24-48小时后,即可使用适当方式进行检测,如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等。
慢病毒包装及感染
(以A549细胞为例)
  • 1、第一天,将293T细胞接种到10cm培养皿中,细胞密度控制在70%-90%为宜;
  • 2、第二天,先分别取慢病毒包装质粒pMD2G 4μg,慢病毒包装质粒pSPAX2 3μg,表达质粒6μg加入到盛有1mL无血清DMEM基础培养基离心管中,吹打混合均匀,然后加入26μL HighGene转染试剂,吹打混合均匀;
  • 3、将1mL质粒/HighGene转染试剂复合物均匀滴加到10cm培养皿中,轻轻晃动细胞培养皿使其均匀分布;
  • 4、细胞转染4-6小时后,半量更换新鲜完全培养基;
  • 5、细胞转染48小时后,常规离心收集细胞培养上清液,用0.45μm滤器过滤细胞上清液,200μL分装后-80℃冻存备用;
  • 6、将待感染的A549接种到6孔板中,细胞密度控制在70%-90%为宜;
  • 7、细胞贴壁后,将200μL慢病毒液均匀滴加到6孔板中,轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布;
  • 8、慢病毒感染18小时后,更换新鲜完全培养基;
  • 9、慢病毒感染48小时后,即可使用适当方式进行检测,如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等,或加入相应筛选药物(G418或Puromycin)可获得稳定表达细胞株。
注意事项
  • 1、转染前细胞应处于良好的生长状态,以对数生长期为佳,推荐细胞传代后12-24小时内、细胞密度为70-90%时进行转染;
  • 2、使用高质量的质粒有利于获得较高的转染效率,推荐使用无内毒素质粒抽提试剂盒抽提质粒,A260/A280比值为1.8~2.0,质粒浓度在300ng/μL以上;
  • 3、在配制转染试剂与质粒复合物时,需使用无血清、无抗生素的基础培养基作为溶剂,细胞培养孔中的完全培养基不影响细胞转染效率;
  • 4、在细胞转染实验中,根据细胞转染效率可适当调整质粒与转染试剂的用量比例,一般质粒的量(μg)与HighGene转染试剂剂量(μL)使用比例在1:1~1:4之间,推荐比例为1:2;
  • 5、对于毒性比较敏感的细胞,建议转染4-6小时后,半量更换新鲜完全培养基;
  • 6、转染试剂如遇沉淀,轻轻摇动管身,至沉淀溶解即可使用;
  • 7、本产品仅限用于科学研究,不得用于临床诊断和治疗。
细胞培养装置 接种细胞数量 细胞培养液体积
96孔板 (1-3)x104 0.1-0.2mL
24孔板 (1-3)x105 0.5-1mL
12孔板 (2-4)x105 1-2mL
6孔板 (3-5)x105 2-3mL
60mm培养皿 (5-10)x105 3-5mL
100mm培养皿 (1-3)x106 8-10mL
125ml摇瓶 (1.5-2.5)x107 30-35mL
500ml摇瓶 (6-10)x107 120-140mL
1000ml摇瓶 (1.2-2)x108 240-280mL

附表1 常用细胞培养装置转染前一天细胞接种的推荐数量和培养体积

细胞培养装置 质粒(μg) HighGene转染试剂(μL) 基础培养基(μL)
96孔板 0.2 0.4 10
24孔板 1 2 50
12孔板 2 4 100
6孔板 2-4 4-8 200
60mm 培养皿 3-5 6-10 400
100mm 培养皿 5-10 10-20 1000
125mL 摇瓶 30-35 60-70 3000
500mL 摇瓶 120-140 240-280 12000
1000mL 摇瓶 240-280 480-560 24000

附表2 常用细胞培养装置细胞转染时,各组分推荐使用剂量(质粒细胞转染)

细胞培养装置 siRNA(pmol) HighGene转染试剂(μL) 基础培养基(μL)
96孔板 4 0.2 10
24孔板 20 1 50
12孔板 40 2 100
6孔板 100 5 200
60mm 培养皿 200 10 400
100mm 培养皿 600 30 1000

附表3 常用细胞培养装置细胞转染时,各组分推荐使用剂量(siRNA细胞转染)

文献引用 (17)

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CustomerOct 172019
评分
Sample
293T,HeLa
Description
Cell transfection time:24 h
CustomerOct 172019
评分
Sample
MCF7
Description
Cell transfection time:24 h
CustomerOct 172019
评分
Sample
A549
Description
Cell transfection time:24 h
CustomerOct 172019
评分
Sample
293T
Description
Cell transfection time:24 h
CustomerJan 102019
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
HeLa
Description
在HeLa细胞中, HighGene无明显细胞毒性
CustomerJan 092019
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
A549
Description
在6孔细胞板中接种A549细胞,细胞转染时,GFP真核表达Loading Amount为2μg,HighGene转染试剂用量为4μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。
CustomerJan 092019
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
MCF-7/U87MG
Description
在6孔细胞板中接种MCF-7细胞或U87MG细胞,细胞转染时,GFP真核表达Loading Amount为2μg,HighGene转染试剂用量为4μL,细胞转染24h后,在荧光显微镜下观察并拍照。
CustomerDec 272018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
293T cell
Description
细胞密度为2.5X10^5/ 3 cm dish,Abclonal?其他三?(TOOLSmoothFect, Lipofectamine 2000 及 Lipofectamine LTX)比?後,四?的?染效率皆??80-90%,Abclonal效率目?略高於三者一些。
CustomerNov 012018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
MCF7
Description
Sample:3 μg,Loading Amount::4μl
CustomerNov 012018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
MCF7
Description
Sample:3 μg,Loading Amount::4μl
CustomerOct 172018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
MCF7
Description
Sample:3 μg,Loading Amount::4μl
CustomerOct 172018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
MCF7
Description
Sample:3 μg,Loading Amount::4μl
CustomerAug 272018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
293T
Description
在6孔细胞板中接种293T细胞,细胞密度为60%左右,使用HighGene转染试剂进行细胞转染,蛋白分子量不同的真核表达Loading Amount均为2μg,细胞转染24小时后,收集细胞制备裂解液进行WB实验。
CustomerAug 242018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
sf9
Description
HighGene转染试剂适用于Sf9昆虫细胞系的转染。在6孔细胞板中接种1×106个Sf9昆虫细胞,使用HighGene转染试剂进行细胞转染,Bacmid-GFPLoading Amount为3μg,细胞转染5天后,在荧光显微镜下观察并拍照。
CustomerAug 162018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
293T
Description
在相同情况下,使用ABclonal和lipo3000转染试剂进行293T细胞转染,48小时后测试抗体表达浓度,ABclonal转染试剂转染效果是lipo3000的近2倍。