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HighGene transfection reagent (RM09014)

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在6孔细胞板中分别接种293T、HCT116、C6三种细胞，细胞密度为60%左右，分别使用HighGene转染试剂和两种市面同类产品进行细胞转染，GFP真核表达质粒用量均为2μg，细胞转染48小时后，在荧光显微镜下观察并拍照。

在6孔细胞板中接种293T和HeLa细胞，分别铺置三个复孔，细胞密度为80%左右，细胞转染时，GFP真核表达质粒用量为2μg，HighGene转染试剂用量为4μL，细胞转染48小时后，在荧光显微镜下观察并拍照。

在6孔细胞板中分别接种293T和HeLa细胞，细胞密度为70%左右，细胞转染时，GFP真核表达质粒用量为2μg，两种不同批次的HighGene转染试剂用量均为4μL，细胞转染24h后，在荧光显微镜下观察并拍照。

在6孔细胞板中接种NIH3T3细胞或Neuro-2a细胞，细胞转染时，GFP真核表达质粒用量为2μg，HighGene转染试剂用量为4μL，细胞转染24h后，在荧光显微镜下观察并拍照。

在125mL摇瓶中接种30mL密度为1 x106 个/mL HEK293F或Sf9悬浮细胞，细胞转染时，GFP真核表达质粒用量为30μg，HighGene转染试剂用量为60μL，细胞转染48小时后，在荧光显微镜下观察并拍照。

在6孔细胞板中接种293T细胞，细胞密度为70%左右，细胞转染时，GFP真核表达质粒用量为2μg， HighGene转染试剂用量为4 μL，细胞转染16、36、48h后，在荧光显微镜下观察并拍照。

在96孔板中接种HEK293T、HeLa、HCT116细胞，每孔接种5000个细胞，细胞密度为50%左右，5个复孔，使用2μL/mL剂量HighGene转染试剂分别处理细胞24h和48h，然后使用CCK8试剂检测细胞的活性。

在96孔板中接种HEK293T、HeLa、HCT116细胞，每孔接种10000个细胞，细胞密度为70%左右，5个复孔，分别使用0、4μL/mL、 8μL/mL、16μL/mL剂量的HighGene转染试剂处理细胞24h，然后在光学显微镜下观察并拍照。

在6孔细胞板中接种293T和HeLa细胞，细胞密度为80%左右，细胞转染时，Cy3 siRNA用量为100pmol，HighGene转染试剂用量为5μL，或YAP1 siRNA用量为200pmol，HighGene转染试剂用量为5μL，细胞转染24h后，在荧光显微镜下观察并拍照（A），或制备细胞样本进行WB实验，YAP1抗体选用ABclonal A1002（B）。

在6孔细胞板中接种293T细胞，细胞密度为80%，细胞转染时，GFP真核表达质粒用量为2μg，Cherry真核表达质粒用量为2μg ，HighGene转染试剂用量为8μL，细胞转染24h后，在荧光显微镜下观察并拍照。

在6孔板中接种HeLa细胞，细胞密度为80%左右，细胞转染时，GFP真核表达质粒用量为2μg， HighGene转染试剂用量为4μL，细胞转染24h后，在荧光显微镜下观察并拍照。反复冻融和37℃处理不影响HighGene转染试剂的细胞转染活性。备注：HighGene转染试剂分别冻融1～5次处理和37℃放置1～5天处理。

在6孔细胞板中接种HepG2细胞，分别在贴壁状态和悬浮状态进行细胞转染，GFP真核表达质粒用量为2μg，HighGene转染试剂用量为4μL，细胞转染24h后，在荧光显微镜下观察并拍照。难转染细胞消化悬浮后可在一定程度上提高转染效率。

All(12)|
货号: RM09014

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背景信息

HighGene转染试剂是一种新型高效的阳离子聚合物。它可以与核酸（包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸）相互作用形成一种复合物将核酸转运到真核细胞内，适用于大部分真核细胞的细胞转染。

产品优势

大量试验测试表明，与常规转染试剂产品相比，HighGene转染试剂具有以下优势：

  • （1）转染效率较高。
  • （2）批次稳定，实验重复性好。
  • （3）对于贴壁细胞和悬浮细胞都适用。
  • （4）无明显细胞毒性。
  • （5）适用于siRNA细胞转染。
  • （6）HighGene转染试剂适用于质粒共转染。
  • （7）HighGene转染试剂适用于慢病毒包装及感染实验。

产品内部验证

验证细胞系
293T、HeLa、HCT116、293F、CHO、SF9、C6、NIH/3T3、MCF-7、HepG2、A549、U87MG、Neuro-2a
储存条件
2-8℃储存，保质期两年

客户验证

验证细胞系
293T、HCT116、HeLa、A549、C6、293F、U87MG、MCF-7、U2OS、NIH3T3、Huh-7

操作流程

贴壁细胞转染
（以293T细胞为例）
  • 1、第一天，将293T细胞接种到6孔板中，细胞密度控制在70%-90%为宜；
    （注：根据实验需求，可以选择不同的细胞培养装置，细胞接种数量和所需培养液体积详见附表1）
  • 2、第二天，先取4μg质粒加入到盛有200μL无血清DMEM基础培养基离心管中，吹打混合均匀，然后加入8μL HighGene转染试剂，吹打混合；
    （注： MEM、1640、F12等基础培养基均可用于HighGene转染试剂的溶剂，不同的细胞培养装置所需质粒的量和HighGene转染试剂剂量详见附表2）
  • 3、将200μL 质粒/HighGene转染试剂复合物均匀滴加到6孔细胞培养板孔中，轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布；
    （注：6孔板中为完全培养基，轻轻晃动细胞培养板即可，切勿剧烈摇动细胞培养板，以免细胞脱落漂浮！）
  • 4、细胞转染4-6小时后，半量更换新鲜完全培养基；
    （注：半量换液时，吸弃一半原有完全培养基，补加一半新鲜完全培养基）
  • 5、细胞转染24～48小时后，即可使用适当方式进行检测，如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等，或加入相应筛选药物（G418或Puromycin）可获得稳定细胞株。
悬浮细胞转染
（以HEK293F细胞为例）
  • 1、第一天，在125mL摇瓶中接种30mL密度为1×106个/mL HEK293F悬浮细胞；
  • 2、第二天，先取30μg质粒加入到盛有3 mL无血清DMEM基础培养基离心管中，吹打混合均匀，然后加入60μL HighGene转染试剂，吹打混合均匀；
  • 3、将3mL质粒/HighGene转染试剂复合物均匀滴加到盛有30mL HEK293F悬浮细胞的125mL摇瓶中，轻轻摇动摇瓶使其混合均匀；
  • 4、细胞转染3～5天后，根据蛋白表达的情况（胞内表达或分泌表达），收集细胞或细胞培养上清，进行后续蛋白纯化操作。
siRNA细胞转染
（以HeLa细胞为例）
  • 1、第一天，将HeLa细胞接种到6孔板中，细胞密度控制在70-90%为宜；
  • 2、第二天，先取100pmol siRNA加入到盛有200μL无血清DMEM基础培养基离心管中，吹打混合均匀，然后加入5μL HighGene转染试剂，吹打混合均匀；
    （注：不同的细胞培养装置所需siRNA的量和HighGene转染试剂剂量详见附表3）
  • 3、将200μL质粒/ HighGene转染试剂复合物均匀滴加到6孔细胞培养板孔中，轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布；
    （注：6孔板中为完全培养基，轻轻晃动细胞培养板即可，切勿剧烈摇动细胞培养板，以免细胞脱落漂浮！）
  • 4、细胞转染4-6小时后，半量更换新鲜完全培养基；
    （注：半量换液时，吸弃一半原有完全培养基，补加一半新鲜完全培养基）
  • 5、细胞转染24-48小时后，即可使用适当方式进行检测，如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等。
慢病毒包装及感染
（以A549细胞为例）
  • 1、第一天，将293T细胞接种到10cm培养皿中，细胞密度控制在70%-90%为宜；
  • 2、第二天，先分别取慢病毒包装质粒pMD2G 4μg，慢病毒包装质粒pSPAX2 3μg，表达质粒6μg加入到盛有1mL无血清DMEM基础培养基离心管中，吹打混合均匀，然后加入26μL HighGene转染试剂，吹打混合均匀；
  • 3、将1mL质粒/HighGene转染试剂复合物均匀滴加到10cm培养皿中，轻轻晃动细胞培养皿使其均匀分布；
  • 4、细胞转染4-6小时后，半量更换新鲜完全培养基；
  • 5、细胞转染48小时后，常规离心收集细胞培养上清液，用0.45μm滤器过滤细胞上清液，200μL分装后-80℃冻存备用；
  • 6、将待感染的A549接种到6孔板中，细胞密度控制在70%-90%为宜；
  • 7、细胞贴壁后，将200μL慢病毒液均匀滴加到6孔板中，轻轻晃动细胞培养板使其均匀分布；
  • 8、慢病毒感染18小时后，更换新鲜完全培养基；
  • 9、慢病毒感染48小时后，即可使用适当方式进行检测，如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等，或加入相应筛选药物（G418或Puromycin）可获得稳定表达细胞株。
注意事项
  • 1、转染前细胞应处于良好的生长状态，以对数生长期为佳，推荐细胞传代后12-24小时内、细胞密度为70-90%时进行转染；
  • 2、使用高质量的质粒有利于获得较高的转染效率，推荐使用无内毒素质粒抽提试剂盒抽提质粒，A260/A280比值为1.8～2.0，质粒浓度在300ng/μL以上；
  • 3、在配制转染试剂与质粒复合物时，需使用无血清、无抗生素的基础培养基作为溶剂，细胞培养孔中的完全培养基不影响细胞转染效率；
  • 4、在细胞转染实验中，根据细胞转染效率可适当调整质粒与转染试剂的用量比例，一般质粒的量（μg）与HighGene转染试剂剂量(μL)使用比例在1:1～1:4之间，推荐比例为1:2；
  • 5、对于毒性比较敏感的细胞，建议转染4-6小时后，半量更换新鲜完全培养基；
  • 6、转染试剂如遇沉淀，轻轻摇动管身，至沉淀溶解即可使用；
  • 7、本产品仅限用于科学研究，不得用于临床诊断和治疗。
细胞培养装置 接种细胞数量 细胞培养液体积
96孔板 (1-3)x104 0.1-0.2mL
24孔板 (1-3)x105 0.5-1mL
12孔板 (2-4)x105 1-2mL
6孔板 (3-5)x105 2-3mL
60mm培养皿 (5-10)x105 3-5mL
100mm培养皿 (1-3)x106 8-10mL
125ml摇瓶 (1.5-2.5)x107 30-35mL
500ml摇瓶 (6-10)x107 120-140mL
1000ml摇瓶 (1.2-2)x108 240-280mL

附表1 常用细胞培养装置转染前一天细胞接种的推荐数量和培养体积

细胞培养装置 质粒(μg) HighGene转染试剂(μL) 基础培养基(μL)
96孔板 0.2 0.4 10
24孔板 1 2 50
12孔板 2 4 100
6孔板 2-4 4-8 200
60mm 培养皿 3-5 6-10 400
100mm 培养皿 5-10 10-20 1000
125mL 摇瓶 30-35 60-70 3000
500mL 摇瓶 120-140 240-280 12000
1000mL 摇瓶 240-280 480-560 24000

附表2 常用细胞培养装置细胞转染时，各组分推荐使用剂量（质粒细胞转染）

细胞培养装置 siRNA（pmol） HighGene转染试剂（μL） 基础培养基（μL）
96孔板 4 0.2 10
24孔板 20 1 50
12孔板 40 2 100
6孔板 100 5 200
60mm 培养皿 200 10 400
100mm 培养皿 600 30 1000

附表3 常用细胞培养装置细胞转染时，各组分推荐使用剂量（siRNA细胞转染）

客户数据及评论 (15)

折叠内容
CustomerOct 172019
评分
Sample
293T,HeLa
Description
Cell transfection time:24 h
CustomerOct 172019
评分
Sample
MCF7
Description
Cell transfection time:24 h
CustomerOct 172019
评分
Sample
A549
Description
Cell transfection time:24 h
CustomerOct 172019
评分
Sample
293T
Description
Cell transfection time:24 h
CustomerJan 102019
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
HeLa
Description
在HeLa细胞中， HighGene无明显细胞毒性
CustomerJan 092019
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
A549
Description
在6孔细胞板中接种A549细胞，细胞转染时，GFP真核表达Loading Amount为2μg，HighGene转染试剂用量为4μL，细胞转染24h后，在荧光显微镜下观察并拍照。
CustomerJan 092019
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
MCF-7/U87MG
Description
在6孔细胞板中接种MCF-7细胞或U87MG细胞，细胞转染时，GFP真核表达Loading Amount为2μg，HighGene转染试剂用量为4μL，细胞转染24h后，在荧光显微镜下观察并拍照。
CustomerDec 272018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
293T cell
Description
细胞密度为2.5X10^5/ 3 cm dish，Abclonal?其他三?(TOOLSmoothFect, Lipofectamine 2000 及 Lipofectamine LTX)比?後，四?的?染效率皆??80-90%，Abclonal效率目?略高於三者一些。
CustomerNov 012018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
MCF7
Description
Sample：3 μg，Loading Amount：：4μl
CustomerNov 012018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
MCF7
Description
Sample：3 μg，Loading Amount：：4μl
CustomerOct 172018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
MCF7
Description
Sample：3 μg，Loading Amount：：4μl
CustomerOct 172018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
MCF7
Description
Sample：3 μg，Loading Amount：：4μl
CustomerAug 272018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
293T
Description
在6孔细胞板中接种293T细胞，细胞密度为60%左右，使用HighGene转染试剂进行细胞转染，蛋白分子量不同的真核表达Loading Amount均为2μg，细胞转染24小时后，收集细胞制备裂解液进行WB实验。
CustomerAug 242018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
sf9
Description
HighGene转染试剂适用于Sf9昆虫细胞系的转染。在6孔细胞板中接种1×106个Sf9昆虫细胞，使用HighGene转染试剂进行细胞转染，Bacmid-GFPLoading Amount为3μg,细胞转染5天后，在荧光显微镜下观察并拍照。
CustomerAug 162018
评分
Experiment Type
瞬时转染
Sample
293T
Description
在相同情况下，使用ABclonal和lipo3000转染试剂进行293T细胞转染，48小时后测试抗体表达浓度，ABclonal转染试剂转染效果是lipo3000的近2倍。

文献引用 (97)

折叠内容

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