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HighGene Transfection reagent

概述
货号: RM09014
ABclonal:HighGene转染试剂具有较高的转染效率
ABclonal:HighGene转染试剂实验重复性高度一致
ABclonal:HighGene转染试剂适用于HEK293F等悬浮细胞的转染
ABclonal:HighGene转染试剂对细胞无明显毒性
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产品描述

HighGene转染试剂是一种新型高效的阳离子聚合物。适用于核酸(包括质粒、siRNA、寡聚核苷酸)的转染,对大部分真核细胞具有很高的转染效率。

产品优势

大量试验测试表明,与常规转染试剂产品相比,HighGene转染试剂具有以下优势:

  • 1、转染效率较高,重复性较好
  • 2、本产品稳定性好,无明显批次差异
  • 3、操作简单,用量较少,性价比高
  • 4、HighGene对于贴壁细胞和悬浮细胞转染都适用
  • 5、无明显细胞毒性,细胞转染后,48小时内无需更换细胞培养液

相关信息

已验证细胞系HEK293T、HCT116、HeLa、A549、C6、HEK293F
储存条件2-8℃储存,保质期两年,避免反复冻融

操作流程

贴壁细胞转染(以HEK293T细胞为例)
  • 1、第一天,将HEK293T细胞接种到24孔板中,细胞密度控制在50%-70%为宜;
    注:根据实验需求,可以选择不同的细胞培养装置,细胞接种数量和所需培养液体积详见附表1
  • 2、第二天,取1μg质粒加入到盛有50μL无血清DMEM基础培养基离心管中,标记为A液;取2μL HighGene转染试剂加入到另一个盛有50μL无血清DMEM基础培养基离心管中,标记为B液;
    注:MEM、1640、F12等基础培养基均可用于HighGene转染试剂的溶剂,不同的细胞培养装置所需质粒的量和HighGene转染试剂剂量详见附表2
  • 3、将50μL含有HighGene转染试剂B液滴加到50μL含有质粒A液中,用移液枪轻轻吹打几次混匀,室温静置15-20分钟;
    注:将含有转染试剂的溶液滴加到含有质粒溶液中,切勿颠倒滴加顺序
  • 4、将100μLHighGene转染试剂/质粒复合物均匀滴加到24孔细胞培养板孔中,轻轻摇动细胞培养板使其均匀分布;
  • 5、细胞转染4-6小时后,更换新鲜完全培养基(可选!)
  • 6、细胞转染24-48小时后,即可使用适当方式进行检测,如RT-PCR、Western、ELISA、报告基因等,或加入相应筛选药物(G418或Puromycin)获得稳定细胞株。
悬浮细胞转染(以HEK293F细胞为例)
  • 1、第一天,将HEK293F细胞接种30mL细胞悬液到125mL摇瓶中,细胞密度控制在(1.0-1.5)×106为宜;
  • 2、第二天,取30μg质粒加入到盛有1.5mL DMEM基础培养基离心管中,标记为A液;取60μL HighGene转染试剂加入到另一个盛有1.5mL DMEM基础培养基离心管中,标记为B液;
  • 3、将1.5mL含有HighGene转染试剂B液滴加到1.5mL含有质粒A溶中,用移液枪轻轻吹打几次混匀,室温静置15-20分钟;
  • 4、将3mL HighGene转染试剂/质粒复合物均匀滴加到盛有30mL HEK293F悬浮细胞的125mL摇瓶中,轻轻摇动摇瓶使其混合均匀;
  • 5、细胞转染5天后,根据蛋白表达的情况(胞内表达或分泌表达),收集细胞或细胞培养上清,进行后续蛋白纯化操作。
注意事项
  • 1、转染前细胞应处于良好的生长状态(对数生长期为佳),推荐细胞传代后12-24小时内、细胞密度为60-70%时进行转染;
  • 2、使用高质量的质粒有利于获得较高的转染效率,推荐使用无内毒素质粒抽提试剂盒抽提质粒;
  • 3、在配制转染试剂与质粒复合物时,需使用无血清、无抗生素的基础培养基作为溶剂,并且须将含有转染试剂的B液滴加到含有质粒的A液中,切勿颠倒滴加顺序;
  • 4、在细胞转染实验中,根据细胞转染效率可适当调整质粒与转染试剂的用量比例,一般质粒的量(μg)与HighGene转染试剂剂量(μL)使用比例在1:1—1:4之间,推荐比例为1:2;
  • 5、本产品仅限用于科学研究,不得用于临床诊断和治疗。
细胞培养装置接种细胞数量细胞培养液体积
96孔板(1-3)x1040.1-0.2mL
24孔板(1-3)x1050.5-1mL
12孔板(2-4)x1051-2mL
6孔板(3-5)x1052-3mL
60mm培养皿(5-10)x1053-5mL
100mm培养皿(1-3)x1068-10mL
125ml摇瓶(1.5-2.5)x10730-35mL
500ml摇瓶(6-10)x107120-140mL
1000ml摇瓶(1.2-2)x108240-280mL

附表1

细胞培养装置质粒(μg)质粒溶剂(μl)HighGene转染试剂(μl)HighGene转染试剂溶剂(μl)复合物溶液(μl)
96孔板0.2100.41020
24孔板12522550
12孔板250450100
6孔板2-41004-8100200
60mm培养皿3-52006-10200400
100mm培养皿5-1050010-205001000
125mL摇瓶30-35150060-7015003000
500mL摇瓶120-1406000240-280600012000
1000mL摇瓶240-28012000480-5601200024000

附表2

细胞培养装置siRNA(pmol)siRNA溶液(μl)转染试剂(μl)转染试剂溶液(μl)复合物溶液(μl)
96孔板4100.21020
24孔板202512550
12孔板4050250100
6孔板1001005100200
60mm培养皿20020010200400
100mm培养皿600500305001000

附表3

HighGene Transfection reagent 检测图片

ABclonal:HighGene转染试剂具有较高的转染效率}

HighGene转染试剂具有较高的转染效率

在6孔细胞板中分别接种293T、HCT116、C6三种细胞,细胞密度为60%左右,分别使用HighGene转染试剂和两种市面同类产品进行细胞转染,GFP真核表达质粒用量均为2μg,细胞转染48小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
ABclonal:HighGene转染试剂实验重复性高度一致}

HighGene转染试剂实验重复性高度一致

在6孔细胞板中接种HeLa细胞,细胞密度为60%左右,使用 HighGene转染试剂进行细胞转染,GFP真核表达质粒用量为2μg,细胞转染48小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
ABclonal:HighGene转染试剂适用于HEK293F等悬浮细胞的转染}

HighGene转染试剂适用于HEK293F等悬浮细胞的转染

在125mL摇瓶中接种30mL密度为1 x106 HEK293F悬浮细胞,使用HighGene转染试剂进行细胞转染,GFP真核表达质粒用量为30μg,细胞转染48小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。
ABclonal:HighGene转染试剂对细胞无明显毒性
}

HighGene转染试剂对细胞无明显毒性

在6孔细胞板中接种293T细胞,细胞密度为60%左右,使用 HighGene转染试剂进行细胞转染,GFP真核表达质粒用量为2μg,细胞转染16、36、48小时后,在荧光显微镜下观察并拍照。

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Oct 172018
瞬时转染 review for HighGene Transfection reagent(RM09014)
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货号RM09014

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细胞系MCF7

细胞密度

质粒用量3 μg

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细胞系293T

细胞密度60%

质粒用量2 μg

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CustomerAug 242018
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细胞系sf9昆虫细胞

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