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本试剂盒用于检测细胞凋亡早期的发生,其中Annexin V为胞内蛋白膜联蛋白家族成员,以钙离子依赖的方式选择性与磷脂酰丝氨酸(PS)结合。PS正常分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把PS外翻到细胞膜外侧。用带有ABflo® 488标记的Annexin V,即ABflo® 488 Annexin V,就可以通过流式细胞仪或荧光显微镜检测到PS外翻这一细胞凋亡的重要特征。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,在嵌入DNA后释放红色荧光。PI不能穿透完整的细胞膜,但可以穿透坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞。因此,将Annexin V与PI联合使用时,PI被排除在活细胞(Annexin V-/PI-)和早期凋亡细胞(Annexin V+/PI-)外,而晚期凋亡细胞和坏死细胞同时被ABflo® 488和PI结合染色呈现双阳性(Annexin V+/PI+)。ABflo® 488激发光波长为491nm,发射光波长为516nm,PI-DNA复合物的最大吸收和发射波长分别为535nm和615nm。
检测数据
在凋亡激活剂孵育C6细胞(大鼠神经胶质瘤细胞)1.5h后,使用ABflo® 488 Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒检测染色效果图。仅被绿色荧光染色的为凋亡前期细胞,被绿色和红色双染的是凋亡晚期或坏死细胞。
使用ABflo® 488 Annexin V/PI细胞凋亡检测试剂盒染色后流式细胞仪检测效果图。A549细胞(人非小细胞肺癌细胞)用凋亡激活剂作用5h后,未经染色(A)、仅用本试剂盒中的PI进行染色(B)、仅用本试剂盒中的ABflo® 488 Annexin V进行染色(C)、用本试剂盒中的ABflo® 488 Annexin V和PI进行双染(D)。从图中可以看出,未经染色的是双阴性细胞(A),仅PI染色后出现了预期的PI染色阳性的细胞,仅ABflo® 488 Annexin V染色出现了预期的ABflo® 488 Annexin V染色阳性的细胞,ABfloTM 488 Annexin V和PI双染出现了预期的仅ABflo® 488 Annexin V染色阳性的早期凋亡细胞和双阳性的晚期凋亡细胞。出现的非预期的细胞点完全在许可的误差范围内。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况、检测仪器等的不同而存在差异,图中数据仅供参考。
产品组成 | RK05875-10T | RK05875-50T | RK05875-100T |
ABflo 488 Annexin V | 50μL | 250μL | 500μL |
Propidium Iodide | 100μL | 500μL | 1mL |
Binding Buffer(10×) | 5mL | 25mL | 50mL |