DL1000 DNA Marker (RK30194)

琼脂糖凝胶可区分相差100bp的DNA，分离DNA范围一般在0.2kb-20kb。如果需要精确到个位数碱基的DNA电泳，可以使用聚丙烯酰胺凝胶系统，因为使用该系统可以将相差一个碱基的两条DNA链分开。

第一：电泳缓冲液缓冲能力差。电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA条带迁移的现象。

第二：电压过高，电泳时间过长。电泳时电压不应该超过20 V/cm，电泳温度不应高于30℃。如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA条带迁移的现象。特别是电压太高易出现缺带现象。电泳过程中由于会产热，因此电泳时间长容易发生条带模糊，特别是小片段会变得模糊。

第三：凝胶放置时间太长或琼脂糖的质量差，导致DNA 条带分辨率降低。

第四：DNA上样量多或DNA有部分降解。

第一：上样量太少。按照说明书要求加样，或根据自己的实验调整上样量。

第二：EB或核酸染料浓度低。如果是电泳结束后染胶，则染胶时间较短。

第三：DNA条带被示踪染料遮盖。适当降低loading dye的用量。

主要是污染了核酸外切酶。建议用灭菌的枪头，用后及时将管盖拧紧。点样时勿将电泳缓冲液带入管中，建议点一次更换一次枪头。

第一：正负极插反。请注意电极及涌动方向。

第二：电泳时间过长。电泳时将溴酚蓝跑到凝胶2/3处即可 停止电泳。更小的片段电泳的距离更短。另外请严格参照厂家说明书要求。

由于在琼脂糖凝胶电泳过程中，DNA条带与EB泳动方向相反并且EB与DNA的结合能力较弱，所以结合EB的量会随时间变化，尤其是DNA Ladder前端条带容易变弱或丢失，因此电泳时将溴酚蓝跑到凝胶2/3处即可停止电泳。如果想精准定量，建议使用EB染胶。

琼脂糖凝胶浓度不合适，导致分辨率降低。制胶不均匀有时也会导致电泳异常。建议使用新制备的凝胶，制胶时注意操作中带来的浓度误差。一般对于大分子量片段，低浓度胶分离效果好；对于小分子量片段，高浓度胶分离效果好。

预加GeneFinder、GelStain、GoldView、SYBR Gold、SYBR Green I、SYBR Green II 和SYBR Safe染料到DNA Ladder中，这些大分子安全染料对Ladder的迁移率都有一定的影响。

第一：电泳缓冲液陈旧。电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，建议经常更换新鲜的电泳缓冲液。

第二：电泳条件不合适。电泳时电压不应超过20V/cm，电压太高也可能导致Ladder条带出现规则现象。此外，凝胶质量差凝胶冷却时凝固不均匀也会导致该现象出现。

第一：DNA Ladder上样量较低，可适当增加上样量。

第二：电泳时间过长，导致Ladder条带跑出凝胶，可缩短电泳时间，降低电压，增加凝胶浓度。

第三：制胶时忘加核酸染料或染胶时间过短。