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Human Treg Panel (RK40005)

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Multicolor flow cytometry panel to identify human regulatory T cells.PBMCs were surface stained with ABflo® 594 Rabbit anti-Human CD4 mAb (A25282,5 μL/Test), APC Rabbit anti-Human CD25 mAb (A26774,5 μL/Test) and ABflo® 488 Rabbit anti-Human CD127/IL-7Rα mAb (A25161,5 μL/Test). All antibodies are validated for Flow cytometry. CD4 T cells are defined as CD4+; regulatory T cells are defined as CD25+CD127low/-.

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货号: RK40005
促销价：   ￥3110
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详细信息

The 3-fluorescence Human Treg Panel has been designed for identify and phenotype CD4+ T regulatory cells in Human blood or tissue samples. ABflo® multi-fluorescence panel RK40005 covers the core CD markers of CD4, CD25 and CD127. Our plots showed clear subgroups of CD4+ T cells, and CD25+CD127low/- Treg cells (cite figures).

应用
FC
反应物种
Human
保存条件
Store at 2-8℃. Avoid freeze.
Buffer: PBS with 0.09% Sodium azide,0.2% BSA,pH7.3.

Panel组分

TargetCatalog No.FluorochromeEx/Em (nm)IsotypeCloneSizeVol. Per Test
CD4A25282ABflo® 594588/604Rabbit IgGARC5142-ABf594100T5 μL
CD25A26774APC650/660Rabbit IgGARC58045-APC100T5 μL
CD127A25161ABflo® 488491/516Rabbit IgGARC66004-ABflo488100T5 μL

Note:
This reagent has been pre-diluted for use at the recommended Volume per Test. We typically use 1×10^6 cells in a 100 µl experimental sample (a test).

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背景信息

FAQ

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ABclonal公司的抗体，可以回收利用几次？

首先，一般抗体不推荐客户回收利用，抗体使用之后缓冲体系已经发生改变，不同客户在回收抗体的保存条件上也会有差异，所以抗体回收使用效果无法保证。另外，ABclonal公司也做过一批抗体回收验证测试，测试结果显示不同抗体可回收次数不同，一般效价越高的抗体，可重复使用的次数越多，客户可根据实验情况来确定。
注：我们将孵育完毕后剩余的抗体回收到离心管中置于4℃保存，效价高的抗体可至少保存1周，至少重复利用3次。

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ABclonal作为国产抗体品牌的优势？

武汉爱博泰克生物（ABclonal）科技有限公司是国产品牌，她成立于2011年，公司依托ABclonal美国波士顿抗体与蛋白研发中心、中国光谷生物城(武汉)抗体生产基地以及上海张江分子酶研发中心，凝聚了十余位来自哈佛大学、麻省理工、复旦大学、上海交大、中科院生化细胞所和武汉大学的全球知名分子和免疫学方面博士，组成我们的科学家团队，通过聚焦抗体与酶核心技术，致力于打破国际技术的垄断，将公司打造成为科研工具和诊断原料的国内领导品牌，乃至弯道超越国际巨头。 我们拥有包括兔多克隆抗体、小鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体的生产研发平台，同时也有包括WB,IHC,IF,IP,CHIP在内的检测平台，我们对每一支自产的抗体进行了严格的检测。当然，我们部分直销地区也可以帮客户代购进口品牌的产品。同时也有抗体定制服务。ABclonal抗体优势：1，严自检，保质量；2产品多，指标全；3，价格低，货期短。注：ABclonal抗体价格体系详情见附件

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ABclonal抗体成分？

ABclonal抗体成分在平时工作当中，常会有客户咨询我们的抗体用的什么buffer进行保存，一般来说，我们的buffer的成分是：PBS含0.03%的proclin300、0.05%牛血清白蛋白、50%甘油；也有一些是PBS含0.03%的proclin300，50%甘油。防腐剂 Proclin 300活性成分主要是2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（MCI）和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮（CMCI）。ProClin生物灭活剂能够迅速穿透细胞膜，抑制对细胞呼吸至关重要的特定酶，因此一接触微生物有机体就会立即抑制细胞活性。ProClin的多个特定毒性位点可以防止微生物产生高水平的耐药性。

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实验方案

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FC

FC 流式标准操作流程

细胞表面染色操作流程
  • 1. 细胞计数：将培养好的细胞收集于50 mL离心管中并计数；500 g离心4 min，去上清；
  • 2. 制备单细胞悬液：将收集的细胞用 1mL 0.5% BSA/PBS溶液重悬，400 g离心3 min，去上清，重复2次；用 0.5% BSA/PBS溶液重悬细胞，分配到96孔板中，每孔50 μL细胞悬液；
  • 3. 一抗孵育：每孔加入一抗稀释液50 μL。振荡，室温反应20 min；
  • 4. 洗涤：400 g离心5 min，去上清；
  • 5. 二抗孵育：如非荧光染料直标抗体加入100 μL 荧光二抗 ，重悬避光振荡，室温反应20 min；直标荧光抗体直接跳转到步骤8；
  • 6. 以 400 g 的速度离心 5 分钟，去上清；
  • 7. 洗涤：加入200 μL 0.5% BSA/PBS重悬，400 g离心5 min，去上清，重复两遍；
  • 8. 用200 μL 0.5% BSA/PBS重悬细胞，上机分析。
细胞胞内染色操作流程
  • 1. 将培养好的细胞收集于50 mL离心管中并计数；500 g离心4 min，去上清；
  • 2. 将收集的细胞用1mL 0.5% BSA/PBS溶液重悬，400 g离心3 min，弃上清，用 0.5% BSA/PBS溶液重悬细胞，按设计方案对应96孔板中每孔加100 μL细胞悬液，离心，去上清；
  • 3. Live/Dead (Zombie NIR)染色，L/D staining solution 用1×PBS按1:1500的比例稀释，按设计将L/D staining solution分配到96孔V型板里，每孔100 μL，重悬每孔中的细胞，混合，避光室温孵育15 min；
  • 4. 400 g离心5 min，弃上清，用FACS buffer洗2次，按设计将1X Intracellular Fixation buffer分配到96孔V型板里，每孔100μL，重悬每孔中的细胞，混合 ，避光室温孵育30min；
  • 5. 400 g离心5 min，弃上清，用1X Permeablization buffer洗2次，按设计将用1X Perm buffer稀释好的一抗分配到96孔V型板里,每孔100μL，重悬每孔中的细胞，混合，避光室温孵育30 min；
  • 6. 400 g离心5 min，去上清，用1X Permeablization buffer洗2次；
  • 7. 按设计将用1X Permeablization buffer 稀释好的荧光二抗分配到96孔V型板里，每孔100μL，重悬每孔中的细胞，混合，避光室温孵育30 min；直标荧光抗体直接跳转到步骤9；
  • 8. 400 g离心5 min，去上清，用1X Permeablization buffer洗2次；
  • 9. 用200μL FACS buffer重悬细胞，上机分析。
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