中和抗体:指有抗病毒活性的抗体,可以识别病毒表面蛋白,阻断病毒与细胞表面的特异性受体结合。有人将能与特定蛋白结合,并阻断其功能的抗体称为中和抗体。 阻断抗体:指与目的蛋白结合直接影响蛋白的功能的抗体,如阻断粘附蛋白与受体配体的结合。阻断抗体在疫苗和抗体药研发中,起着非常重要的作用。 近年来,以PD-1及PD-L1抗体药物为代表,针对蛋白质特殊功能的中和抗体受到了广泛关注。ABclonal提供病原体(如病毒)、免疫检查点、趋化因子、血管生成因子和发育因子的中和/阻断功能抗体开发服务。

抗体药发现平台

抗体制备特色

鼠单克隆抗体杂交瘤细胞制备
  1. 多种类型免疫原供选择
  1. 免疫原活性验证
  1. 多种免疫动物供选择
  1. 高通量筛选技术和平台,筛选最优的抗体
  1. KO验证体系-抗体验证金标准
  1. 高通量ELISA、FACS验证平台
  1. 中和检测、配体阻断、亲和力排序、交叉反应、表位鉴定等多种验证平台

抗体工程与改造

抗体测序及重组抗体大规模生产
  1. 鼠单克隆抗体测序
  1. 兔单克隆抗体测序
  1. 重组单克隆抗体稳定细胞株构建
  1. 重组抗体大规模生产


第四代重组兔单克隆抗体筛选平台抗
  1. 现代免疫学技术结合分子生物学技术
  1. 单个B细胞培养技术
  1. 高通量筛选及验证技术
  1. KO验证体系-抗体验证金标准
  1. 多元化的抗体验证平台
  1. 直接得到抗体序列,高性能重组兔单克隆抗体
  1. 具有更多的多样性,可识别更多的抗原表位
  1. 具有更高的特异性和亲和力,亲和力平均为鼠抗的100-1000倍
  1. 检测灵敏度提高2-3个数量级


抗体人源化及亲和力成熟
  1. 人源化抗体方案设计及分析
  1. 保证人源化抗体亲和力水平

案例展示

Case 1

病毒中和抗体开发
利用经典杂交瘤鼠单克隆技术,为客户开发肠道病毒治疗抗体。通过多种实验方案和筛选方案,筛选出多株识别不同人类肠道病毒的特异性单抗,得到有中和活性的高品质鼠单克隆抗体。疫苗和抗体药同时开发,为治疗肠道病毒提供了解决方案。

单抗与四种不同方式制备的肠道病毒抗原反应

  1. 筛选出多株识别不同肠道病毒(Human Enterovirus)的特异性单克隆抗体;
  2. 筛选出两株单抗(上图所示10G2和1F2)具有中和活性,纯化腹水中和效价大于1:2048。其中,10G2和1F2均识别空间表位,且均为肠道病毒中具有重要生物学活性的表位;
  3. 筛选出一株单抗可以识别多种肠道病毒通用表位。
Case 2

病毒中和/阻断抗体开发
诺如病毒,又称诺瓦克病毒(Norwalk Viruses,NV ),是人类杯状病毒科(Human Calicivirus,HuCV)中诺如病毒(Norovirus,NV)属的一种病毒。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行,全年均可发生感染,诺如病毒感染性腹泻属于自限性疾病,没有疫苗和特效药物,因此研究极具挑战。

ELISA测试阻断活性

单抗表位特性检测

  1. ABclonal定制开发的诺如蛋白衣壳蛋白(Antigen 1)鼠单抗(mAb)能有效阻止诺如病毒样颗粒与人体受体蛋白HBGA的结合,阻断效果与多克隆抗体(PcAb)相当,且不会与其它基因型(Antigen 2)的病毒颗粒产生交叉反应。
  2. 该单抗能识别native状态的蛋白,而不能识别变性后的蛋白,说明抗体的识别表位为构象表位,而不是线性表位。
Case 3

高保真酶封闭抗体开发
封闭抗体与热启动酶具有很高的亲和力,可以封闭酶的活性。在预变性温度下加热30秒完全失活,即释放出聚合酶活性。使用该热启动封闭酶可以有效抑制引物非特异性退火导致的扩增。

B家族高保真酶抗体对酶的封闭作用PCR测试

  1. 封闭抗体:
  2. E:抗体: 1:0 1:0.5 1:0.8 1:1 1:2
  3. 孵育温度/时间:37℃/1小时 孵育时酶浓度:200ng/μL

结果:随着酶与抗体比例的增加,特异性增强,当比例为1:1或者1:2时表现较好。

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