| 组分名称 | 规格1 | 规格2 |
| Golden Gate 2X Assembly Mix (Eco31Ⅰ) | 100 μL | 500 μL |
Q1：可以组装多大的片段？
目前测试结果显示，Golden Gate 2X Assembly Mix (Eco31Ⅰ)可以将2 kb的片段组装入5.6 kb的载体中。
Q2：一次反应最多可以组装多少个片段？
一次反应可以组装的DNA片段数量依赖于片段的长度和序列。Golden Gate 2X Assembly Mix (Eco31Ⅰ)已经被证明可以成功将10个0.25 kb的片段一次性插入载体中。但推荐一次反应最好不要超过4个插入片段，以保证插入片段能正确组装并产生阳性克隆。若多个片段一次反应组装失败，建议分成几步组装，降低单次反应的组装片段数量。
Q3：能够使用的最短插入长度是多长？
目前测试的片段中，编码sgRNA的DNA序列20 bp可成功组装，且效率高达100%。
Q4：能够组装≤250 bp的dsDNA片段吗？
可以。当片段大小≤250 bp时，为了组装效果更佳，插入片段的使用量为载体的2倍，连接效率可达到100%。
Q5：可以使用更长或更短的反应时间吗？
可以。当插入单个的片段时，37℃，5 min的反应时间已经足够。当组装超过1个片段时，推荐30-60个循环的反应，共60-120 min的反应时间。在某些情况下，更长的反应时间可适当地提高组装效率，但是不能超过60个循环。
Q6：反应可以在其他温度下进行吗？
可酶切反应在37°C反应时最佳，但是在16-50°C也能工作。
Q7：可以用Golden Gate 2X Assembly Mix (Eco31Ⅰ)的产物来做模板，做后续的PCR吗？
可以。组装好的产物是完整的序列，可以用做后续的PCR扩增。
