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2X 通用型 SYBR Green 快速qPCR预混液

Summary

货号: RK21203RM21203

浓度: 2X

规格:

优惠价
在中国,您可以从我们的授权经销商购买 ABclonal 产品或获得技术支持。在您加入购物清单后,我们会为您推荐您所在地区的经销商。

产品描述

荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)是通过检测DNA双链结合的染料,通常是SYBR® Green I,对DNA扩增过程中的起始量进行定量监测的技术手段。ABclonal 2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix是采用SYBR® Green I 嵌合荧光法进行qPCR反应的专用试剂。本产品为通用型试剂,通过对绝大部分仪器的SYBR® / FAM通道进行荧光信号定量检测,可以获得PCR过程中DNA扩增的真实数据。本产品为通用型qPCR试剂,使用ABclonal公司设计的特殊的参比染料,具有更为灵敏的分辨率,并且适用于市面上所有型号的荧光定量PCR仪器(包括High ROX, Low ROX以及No ROX需求的仪器)。本产品采用热启动Taq酶进行扩增,在保证扩增效果的同时极大地提高了产品的特异性。同时通过对qPCR Mix的Buffer体系的优化,使产品适用于多个物种,为多学科的实验需求提供了强有力的工具。
本产品为2X Mix混合液,除了引物和模板以外包含了所有qPCR所需成分,为实验操作提供了极大的便利。

产品组分

2X Universal SYBR Green Fast qPCR MixRM21203

产品信息

应用DNA扩增, PCR 和 qPCR
保存温度-20°C
热失活
Unit Assay ConditionsRM21203,2X Universal SYBR Green Fast qPCR Mix|

评论列表

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Cat.No
RK21203
Experiment Type
RT,qPCR
Sample
293T RNA
Description
实验模板为293T 细胞RNA,检测基因为GAPDH 和RXFP4;图中,蓝色与浅蓝色为使用ABclonal RT 及qPCR 试剂实验结果,绿色和浅绿色为使用竞品V 的RT 及qPCR 试剂实验结果;从(A)可以看到,ABclonal 产品在基因GAPDH 和RXFP4 的检测实验中,扩增效率和灵敏性更高;从(B&C)可以看到,ABclonal 产品的特异性和荧光信号更强。
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Cat.No
RK21203
Experiment Type
RT,qPCR
Sample
H716 RNA
Description
实验模板为H716 细胞RNA,检测基因为GAPDH 和RXFP4;图中,蓝色与浅蓝色为使用ABclonal RT 及qPCR 试剂实验结果,绿色和浅绿色为使用竞品V 的RT 及qPCR 试剂实验结果;从(D)可以看到,ABclonal 产品在基因GAPDH 和RXFP4 的检测实验中,扩增效率和灵敏性更高;从(E&F)可以看到,ABclonal 产品的特异性和荧光信号更强。

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qPCR实验常见问题与解决方案

1、熔解曲线出现多峰

引物设计不够优化:根据引物设计原则重新设计引物。

引物浓度太高:适当降低引物浓度。

2、扩增曲线形状异常

扩增曲线不光滑:信号太弱,提高模板浓度并重复实验。

个别扩增曲线骤降:反应管内有气泡,由于温度升高后气泡破裂,使仪器检测到的荧光值突然降低所致。处理样本时要注意离心,加样过程中尽量避免吸打出气泡。

扩增曲线上飘:仪器测试默认基线设置为3至15个循环荧光值的标准差,可根据实际扩增情况进行相应基线调整。

3、反应结束无扩增曲线出现

反应循环数不够:一般设置循环数为40,但需注意的是过多的循环会增加过多的背景信号,降低数据可信度。

确认引物是否降解:长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性,以排除引物降解的可能性。

确认程序中是否设置了信号采集步骤:两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段;三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。

模板浓度太低:减少稀释程度并重复实验。

模板降解:重新制备模板,重复实验。

预变性时间不足:本产品采用热启动的Taq酶,请确保按照反应程序设置的3 min预变性时间进行实际操作。

4、Ct值出现太晚

扩增效率极低:优化反应条件,重新设计引物。

模板浓度太低:减少稀释程度,重复实验。

模板降解:重新制备模板,重复实验。

PCR产物太长:一般将PCR产物长度设计为70~200 bp范围内。

反应体系中存在PCR反应抑制剂:一般为加入模板时带入,加大模板稀释倍数或者重新制备新的模板。

预变性时间不足:本产品采用热启动的Taq酶,请确保按照反应程序设置的3 min预变性时间进行实际操作。

5、阴性对照(NTC)出现明显扩增

反应体系或者水被污染:更换新的Buffer或者水进行重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

引物二聚体的出现:一般在35个循环以后阴性对照出现扩增属正常情况,可配合熔解曲线进行分析。

6、重复性差

加样体积不准:使用性能较好的移液枪,扩大反应体系,增加组分加入体积。

定量PCR仪孔间温度不一致:定期校准仪器。

模板浓度太低:模板浓度越低,重复性越差,减少模板稀释度或提高加样体积。

阈值设置:对于不同板间的重复试验,请确保两次试验仪器阈值设置保持一致。

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RT,qPCR
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293T RNA
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Experiment Type
RT,qPCR
Sample
H716 RNA
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实验模板为H716 细胞RNA,检测基因为GAPDH 和RXFP4;图中,蓝色与浅蓝色为使用ABclonal RT 及qPCR 试剂实验结果,绿色和浅绿色为使用竞品V 的RT 及qPCR 试剂实验结果;从(D)可以看到,ABclonal 产品在基因GAPDH 和RXFP4 的检测实验中,扩增效率和灵敏性更高;从(E&F)可以看到,ABclonal 产品的特异性和荧光信号更强。

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