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Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix (RK21204)

货号: RK21204

促销价:   ¥1080
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产品信息

ABclonal Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix是采用SYBR® Green I 嵌合荧光法进行qPCR反应的专用试剂。本产品通过对SYBR® / FAM通道进行荧光信号定量检测,获得PCR过程中DNA扩增的真实数据。本产品采用抗体法热启动Taq DNA聚合酶进行扩增,在保证扩增效果的同时极大地提高了特异性。
ABclonal Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix为2X浓度预混液,除引物和模板外包含了所有qPCR反应所需成分,为实验操作提供了极大的便利。

产品特点
采用SYBR Green I 荧光结合双链DNA具有高灵敏度和信噪比;
兼容需高浓度ROX的荧光定量PCR仪器;
采用热启动Taq DNA 聚合酶提高特异性;
预混型试剂操作简便;
适合新冠病毒检测;

应用qPCR
产品组分
  • Genious 2X SYBR Green Fast qPCR MixRM21204
  • 50X ROX Reference Dye IRM21456
  • 50X ROX Reference Dye IIRM21457
保存温度-20°C

FAQs

Q1:熔解曲线出现多峰

引物设计不够优化:根据引物设计原则重新设计引物。

引物浓度太高:适当降低引物浓度。

扩增曲线不光滑:信号太弱,提高模板浓度并重复实验。

个别扩增曲线骤降:反应管内有气泡,由于温度升高后气泡破裂,使仪器检测到的荧光值突然降低所致。处理样本时要注意离心,加样过程中尽量避免吸打出气泡。

扩增曲线上飘:仪器测试默认基线设置为3至15个循环荧光值的标准差,可根据实际扩增情况进行相应基线调整。

反应循环数不够:一般设置循环数为40,但需注意的是过多的循环会增加过多的背景信号,降低数据可信度。

确认引物是否降解:长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性,以排除引物降解的可能性。

确认程序中是否设置了信号采集步骤:两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段;三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。

模板浓度太低:减少稀释程度并重复实验。

模板降解:重新制备模板,重复实验。

预变性时间不足:本产品采用热启动的Taq酶,请确保按照反应程序设置的3 min预变性时间进行实际操作。

扩增效率极低:优化反应条件,重新设计引物。

模板浓度太低:减少稀释程度,重复实验。

模板降解:重新制备模板,重复实验。

PCR产物太长:一般将PCR产物长度设计为70~200 bp范围内。

反应体系中存在PCR反应抑制剂:一般为加入模板时带入,加大模板稀释倍数或者重新制备新的模板。

预变性时间不足:本产品采用热启动的Taq酶,请确保按照反应程序设置的3 min预变性时间进行实际操作。

反应体系或者水被污染:更换新的Buffer或者水进行重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

引物二聚体的出现:一般在35个循环以后阴性对照出现扩增属正常情况,可配合熔解曲线进行分析。

加样体积不准:使用性能较好的移液枪,扩大反应体系,增加组分加入体积。

定量PCR仪孔间温度不一致:定期校准仪器。

模板浓度太低:模板浓度越低,重复性越差,减少模板稀释度或提高加样体积。

阈值设置:对于不同板间的重复试验,请确保两次试验仪器阈值设置保持一致。

文献引用 (5)

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