产品中心 / 分子生物学产品 / qPCR / 染料法qPCR

Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix

Summary

货号: RK21204

规格:

优惠价
在中国,您可以从我们的授权经销商购买 ABclonal 产品或获得技术支持。在您加入购物清单后,我们会为您推荐您所在地区的经销商。

产品描述

荧光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)是通过检测DNA双链结合的染料,通常是SYBR® Green I,对DNA扩增过程中的起始量进行定量监测的技术手段。ABclonal Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix是采用SYBR® Green I 嵌合荧光法进行qPCR反应的专用试剂。本产品通过对SYBR® / FAM通道进行荧光信号定量检测,可以获得PCR过程中DNA扩增的真实数据。本产品采用抗体法热启动Taq酶进行扩增,在保证扩增效果的同时极大地提高了产品的特异性。同时通过对qPCR Mix的Buffer体系的优化,使产品适用于多个物种,为多学科的实验需求提供了强有力的工具。本产品为2X Mix混合液,除了引物和模板以外包含了所有qPCR所需成分,为实验操作提供了极大的便利。

产品组分

Genious 2X SYBR Green Fast qPCR MixRM21204
50X ROX Reference Dye IRM21456
50X ROX Reference Dye IIRM21457

产品信息

应用DNA Amplification, PCR and qPCR
保存温度-20°C
Unit Assay ConditionsRM21457,50X ROX Reference Dye II|RM21456,50X ROX Reference Dye I|RM21204,Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix (No ROX)|

如果您的问题未得到解决,请联系我们的技术支持团队为你进一步解答。

联系我们

qPCR实验常见问题与解决方案

1、熔解曲线出现多峰

引物设计不够优化:根据引物设计原则重新设计引物。

引物浓度太高:适当降低引物浓度。

2、扩增曲线形状异常

扩增曲线不光滑:信号太弱,提高模板浓度并重复实验。

个别扩增曲线骤降:反应管内有气泡,由于温度升高后气泡破裂,使仪器检测到的荧光值突然降低所致。处理样本时要注意离心,加样过程中尽量避免吸打出气泡。

扩增曲线上飘:仪器测试默认基线设置为3至15个循环荧光值的标准差,可根据实际扩增情况进行相应基线调整。

3、反应结束无扩增曲线出现

反应循环数不够:一般设置循环数为40,但需注意的是过多的循环会增加过多的背景信号,降低数据可信度。

确认引物是否降解:长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性,以排除引物降解的可能性。

确认程序中是否设置了信号采集步骤:两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段;三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。

模板浓度太低:减少稀释程度并重复实验。

模板降解:重新制备模板,重复实验。

预变性时间不足:本产品采用热启动的Taq酶,请确保按照反应程序设置的3 min预变性时间进行实际操作。

4、Ct值出现太晚

扩增效率极低:优化反应条件,重新设计引物。

模板浓度太低:减少稀释程度,重复实验。

模板降解:重新制备模板,重复实验。

PCR产物太长:一般将PCR产物长度设计为70~200 bp范围内。

反应体系中存在PCR反应抑制剂:一般为加入模板时带入,加大模板稀释倍数或者重新制备新的模板。

预变性时间不足:本产品采用热启动的Taq酶,请确保按照反应程序设置的3 min预变性时间进行实际操作。

5、阴性对照(NTC)出现明显扩增

反应体系或者水被污染:更换新的Buffer或者水进行重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

引物二聚体的出现:一般在35个循环以后阴性对照出现扩增属正常情况,可配合熔解曲线进行分析。

6、重复性差

加样体积不准:使用性能较好的移液枪,扩大反应体系,增加组分加入体积。

定量PCR仪孔间温度不一致:定期校准仪器。

模板浓度太低:模板浓度越低,重复性越差,减少模板稀释度或提高加样体积。

阈值设置:对于不同板间的重复试验,请确保两次试验仪器阈值设置保持一致。

Ask Us About This Product

submit your question on RK21204 below

During business hours, we will respond to your email with in 24 hours. For any questions submitted on the weekend, a response will be received on Monday.

For immediate assistance during business hours M-F (excluding major holidays), please contact us.

Publishing research using RK21204? Please let us know so that we can cite the reference in this datasheet.