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Sonication ChIP Kit (RK20258)

货号: RK20258
促销价:   ¥1152
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产品信息

产品描述
染色质免疫沉淀 (ChIP) 技术是一种用于在细胞天然染色质背景下检测蛋白质-DNA 相互作用的通用技术。它可用于检测整个基因位点上某种特定组蛋白修饰的相对数量,还可用于分析转录因子与辅助因子、DNA复制因子和DNA修复蛋白的结合。 ABclonal Sonication ChIP Kit(RK20258) 是一套完整的 ChIP 试剂盒。它包含对 24 次染色质免疫沉淀分析所需的缓冲液和试剂,可用于 ChIP-qPCR 和 ChIP-seq。
Sonication ChIP Kit 还提供确保 ChIP 实验成功的重要对照。试剂盒包含对人核糖体蛋白 L30 (RPL30) 基因进行 PCR 检测所需的阳性对照 Histone H3 Antibody、阴性对照 Normal Rabbit IgG Antibody 和引物。组蛋白 H3 是染色质的一种核心组分,能在基因组内结合多数 DNA 序列,包括 RPL30 基因座。因此,Histone H3 Antibody 可用作通用阳性对照。
产品特点
  • 简便快速:包含样本处理及实验操作全部试剂,可在约9 h 内获得纯化的DNA
  • 效率高:细胞核抽提和裂解溶液及免疫沉淀过程均经高度优化
  • 全面:包含优化的阳性对照试剂(组蛋白H3抗体,RPL30基因2号外显子PCR引物)
工作流程
产品保存
Box A 4℃,Box B -20℃。
产品组分
组分 货号 8 RXN 24 RXN
Box A Glycine Solution (10X)* RM20700 1.5 mL 10 mL
Cell Swelling Buffer (10X) RM20701 1.8 mL 5.3 mL
ChIP Sonication Buffer (10X) RM20702 1.5 mL 4.3 mL
ChIP Low Salt Wash Buffer (10X) RM20703 1.8 mL 5.7 mL
ChIP High Salt Wash Buffer (5X) RM20704 1.8 mL×4 10 mL
LiCl Buffer (5X) RM20705 1.8 mL 5.3 mL
TE Buffer (100X) RM20706 200 uL 580 uL
ChIP Elution Buffer RM20707 1.4 mL×2 8 mL
5 M NaCl RM20708 200 uL 700 uL
Box B 1 M DTT RM20164 32 uL 100 uL
Proteinase K (20 mg/mL) RM20713 64 uL 210 uL
RNase A (10 mg/mL) RM20709 64 uL 210 uL
Human RPL30 Exon2 Primers (5 μM) RM20710 40 uL 160 uL
ChIP-grade Histone H3 antibody (1 mg/mL)* RM20711 10 uL 20 uL
IgG (1 mg/mL)* RM20712 10 uL 20 uL

检测数据

折叠内容 >
1. 染色质超声片段化检测

使用接触式超声仪(新芝,Scientz-IID)对1 X 107 个293T细胞进行不同时间的超声破碎,超声条件为: 功率50W, 超声开1s, 关1s。从电泳结果来看,超声时间3min后DNA片段大小可以满足qPCR检测的需求;超声时间9 min后DNA片段大小可以满足NGS建库需求。

2. ChIP富集效率检测

在293T细胞中用Tri-Methyl-Histone H3-K27 Rabbit pAb (A2363)和Rabbit Control IgG (AC005)抗体进行ChIP实验。使用ABclonal Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix (RK21204)试剂对靶基因RPL30、MYOD1和MYT1引物进行qPCR检测,计算每个基因的富集效率(ChIP样本相对于Input样本),结果显示,Tri-Methyl-Histone H3-K27 Rabbit pAb对各基因的富集效率都远高于阴性对照Rabbit Control IgG,说明H3K27me3修饰在这些基因上存在富集。

在293T细胞中用Tri-Methyl-Histone H3-K4 Rabbit pAb (A2357)和Rabbit Control IgG (AC005)抗体进行ChIP实验。使用ABclonal Genious 2X SYBR Green Fast qPCR Mix (RK21204)试剂对靶基因ATP1A1和GAPDH引物进行qPCR检测,计算每个基因的富集效率(ChIP样本相对于Input样本)。结果显示,Tri-Methyl-Histone H3-K4 Rabbit pAb对各基因的富集效率远远高于阴性对照Rabbit Control IgG,说明H3K4me3修饰在ATP1A1和GAPDH上存在富集。

3. ChIP-seq Peak可视化分析

使用Di-Methyl-Histone H3-K79 Rabbit pAb (A2368)分别对1 X 107数量的K562和HeLa细胞分别进行ChIP-seq实验。图片展示了12号染色体上176 Kb的一段代表性区域的富集情况,结果显示 H3K79me2 的已知靶标基因 GAPDH在Di-Methyl-Histone H3-K79 Rabbit pAb ChIP实验中得到了明显富集。

FAQs

文献引用 (10)

折叠内容 >

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说明书

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