DNase I (脱氧核糖核酸酶I)是一种可消化单链或双链DNA的脱氧核糖核酸内切酶，它识别并切割磷酸二酯键，产生5'端为磷酸基团，3'端为羟基的单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸。DNase I的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Mn2+，Zn2+等激活。5 mM Ca2+可保护酶使其不被水解。而在Mg2+存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。形成平末端或有1-2个核苷酸突出的粘末端DNA片段。
